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1.保鮮膜的質(zhì)量。a.國(guó)產(chǎn)的保鮮膜,，很多廠家偷工減料打價(jià)格戰(zhàn),，造成保鮮膜很薄亦破損。ECL滴加到保鮮膜上容易從肉眼不易分辯的小孔泄露,，一方面ECL反應(yīng)不充分,，另一方面ECL所含液體會(huì)溶解試驗(yàn)臺(tái)上殘留未知的化學(xué)藥品顆粒（也許你或其他人曾經(jīng)不小心打翻過(guò)某種化合物）、灰塵等等,，造成熒光淬滅。在簡(jiǎn)述原理時(shí),，我曾經(jīng)提到過(guò)很多化合物,、金屬離子能直接催化過(guò)氧化物水解,，在極短的時(shí)間內(nèi)消耗掉所有的HRP酶，熒光轉(zhuǎn)瞬即逝,。

b. 保鮮膜的化工原料或拉制過(guò)程中,，殘留未知的化學(xué)試劑，引起熒光淬滅,；廉價(jià)的保鮮膜問(wèn)題尤多,。

目前，國(guó)產(chǎn)的就“妙潔”比較過(guò)關(guān),，保鮮膜厚度和化學(xué)物殘留都不影響ECL顯影,。

如果買(mǎi)不到合格的保鮮膜，也可以用其他物品替代,；但要特別注意這些支持物表面的干凈,，好不要有任何化學(xué)試劑殘留，包括風(fēng)干的TBST鹽結(jié)晶顆粒,。

2.ECL孵育結(jié)束后膜需要控干,。中學(xué)物理學(xué)過(guò)水會(huì)吸收光譜，因此任何液體包括ECL溶液本身都會(huì)干擾熒光強(qiáng)度,，所以ECL孵育結(jié)束時(shí)需要控干,。一般夾起膜，讓膜的一角或一邊接觸吸水紙,；但是請(qǐng)注意不能讓膜*干掉,。某些信號(hào)較弱的ECL，膜*干掉后熒光會(huì)消失,；較好的試劑盒,，熒光相對(duì)穩(wěn)定，但*吸干以后,，背景熒光也會(huì)升高,，而且會(huì)嚴(yán)重影響重新標(biāo)記新抗體時(shí)的背景。因此,，按照我的方法,，讓自由流下的多余的ECL被吸走就好。

3.控干的膜要仔細(xì)用保鮮膜包被,，防止接觸外界異物造成熒光淬滅,；同時(shí)，包裹保鮮膜時(shí)要細(xì)心,，盡量不讓正面保鮮膜和膜之間出現(xiàn)皺褶,。皺褶的地方會(huì)堆積多余的ECL，要么形成一條熒光的亮線,；要么由于液體吸收熒光或者局部區(qū)域HRP過(guò)度消耗,，呈線條狀淬滅,。

4.在膜放入壓片夾之前，好肉眼觀察一下熒光信號(hào)的強(qiáng)弱,，這有利于判斷實(shí)驗(yàn)可能出現(xiàn)的問(wèn)題,。很多人提問(wèn)看見(jiàn)很強(qiáng)的熒光了，但怎么壓片都沒(méi)有信號(hào),，那么就是快速淬滅（閃滅,，再怎么快速操作也拿不到這種情況下的熒光信號(hào)）造成的；有這個(gè)觀察至少能夠判斷ECL孵育之前實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)該問(wèn)題不大,，而問(wèn)題主要是淬滅,。如果你省略這個(gè)步驟，那問(wèn)題就非常復(fù)雜了,，因?yàn)橹叭魏尾僮鞫伎赡軐?dǎo)致白板,，根本無(wú)法判斷。