化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
小鼠胰島素（insulin）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
閱讀：976 發(fā)布時間：2020-6-8中文名稱小鼠胰島素酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
英文名稱Mouse insulin elisa kit
樣品類型血清/血漿/細胞培養(yǎng)上清/尿液/組織樣本
檢測范圍0.17-5.5 ng/mL
靈敏度0.09 ng/mL
反應(yīng)時間3.5h
背景介紹:
胰島素是糖代謝中主要的激素之一,。胰腺的3細胞島細胞產(chǎn)生胰島素前體 蛋白,，前體蛋白被加工成C肽和胰島素。它們以等摩爾濃度進入血循環(huán)中,。成熟的 胰島素由A、B兩條鏈組成,。這兩條鏈?zhǔn)峭ㄟ^兩個二硫鍵橋接形成有功能的胰島 素分子,。血漿葡萄糖濃度的變化是胰島素產(chǎn)生并分泌的主要刺激因素,，產(chǎn)生的 胰島素具有一些代謝調(diào)節(jié)作用。其主要的作用是,，將外周血中糖轉(zhuǎn)運到肝臟中 貯存起來。一些諸如肝糖生成障礙或在促進血糖升高的激素諸如胰高血糖素,、腎 上腺素,、生長激素和皮質(zhì)醇等作用下促進肝糖分解都可拮抗胰島素的作用,。
［檢測原理:
Solarbio(Solarbio*)ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的醯聯(lián)免疫吸附檢 測技術(shù)。胰島素捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上,，當(dāng)同時加入標(biāo)本或參考品和HRP 耦連的抗小鼠胰島素抗體時，其中胰島素的不同位點會與捕獲抗體和HRP偶聯(lián) 的抗小鼠胰島素抗體結(jié)合,，形成夾心復(fù)合物,，錨定在固相載體板上,，其它游離的 成分通過洗滌的過程被除去。后加入顯色劑,，若樣本中存在胰島素將會形成免 疫復(fù)合物,，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì),，在加入終止液 后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測,，使其450nm處的OD值,，胰島素濃度與OD450值之 間呈正比，通過參考品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，對照未知樣本中OD值，即可算出標(biāo)本中胰 島素濃度,。
2. 靈敏度：
低可檢測小鼠Insulin濃度達0.1ng/ml,
20個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度OD的平均值加上兩個標(biāo)準(zhǔn)差,，計算相應(yīng)的可檢測濃度。
3. 特異性：
不與IGF-U IGF-IU小鼠C肽,、大鼠C肽反應(yīng)，與豬胰島素,、綿羊胰島素、大鼠胰 島素,、牛胰島素及人胰島素分別有628%, 256%, 146%, 110%和195%交叉反 應(yīng),。
4. 重復(fù)性：
板內(nèi),，板間變異系數(shù)＜10%
5. 回收率：
在選取的健康小鼠血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入3個不同濃度水平的小鼠Insulin計 算回收率,。
I 樣本類型 | 平均回收率(%) | 范圍(%) I |
血漿 | 93 | 86-101 |
細胞培養(yǎng)上清 | 95 | 87-103 |
6. 線性稀釋：
分別在選取的4份健康小鼠血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小Mlnsulin,在標(biāo) 準(zhǔn)曲線動力學(xué)范圍內(nèi)進行稀釋,，評估線性。
I稀釋比例 | 回收率(%) | 血漿 | 細胞培養(yǎng)上清I |
1:2 | 平均回收率(% ) | 96 | 102 |
范圍(％) | 88-105 | 92-113 | |
1:4 | 平均回收率(% ) | 98 | 103 |
范圍(％) | 90-107 | 94-112 |
注意事項:
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑,。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在2-8P冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,，請丟棄,。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù)30min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的 樣品,。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致,。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用1次性試管,，槍頭,，封板膜（淤）及潔凈塑料容 器,。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到 管壁及瓶蓋上,，使用前清離心處理（5-10S即可）,，使管壁上的液體集中在管底 部,，取用時,請用移液器小心吹打幾次,。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,，請不要使用其他來源試劑盒 內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
I安全提示:
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護,； 在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸,，請用大量滑水滑 洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī) 定執(zhí)行,。
說明書 | 1份 | 1份 |
|
自備實驗器材（不提供，可代購）1.png)
1. 酶標(biāo)儀（主波長450nm,參考波長630nm）
2. 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000 n I
3. 洗板機或洗瓶
4.