化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
病毒DNA/RNA核酸提取試劑盒
閱讀：1028 發(fā)布時間：2020-5-21【產(chǎn)品名稱】：病毒DNA/RNA核酸提取試劑盒
【包裝規(guī)格】：50T/盒
【預(yù)期用途】
本產(chǎn)品適合于從血清,、血漿,、牛奶,、體液、培養(yǎng)液,、組織勻漿液,、拭子等樣品中提取病毒RNA或DNA。試劑盒基于硅膠柱純化技術(shù),，提取過程中無需使用有毒的酚仿抽提,，也無需進(jìn)行耗時的醇類沉淀。獲得的DNA/RNA可直接用于RT-PCR,、PCR,、Northern雜交、以及各種病毒檢測等,。
【主要組成成份】
組成 | 50T/盒 |
純化柱 | 50個 |
2ml 收集管 | 50個 |
蛋白酶K（B盒）取出保存-20° | 1.2ml |
裂解液（Buffer AL） | 20 ml |
洗滌液（Buffer RW） | 100 ml |
Nuclease Free Water | 10 ml |
【儲存條件及有效期】
本產(chǎn)品部分組份（不含蛋白酶K）保存于室溫(15-25℃),，有效期12個月，長期保存時需置于2-8℃,；蛋白酶K保存于-20℃,，有效期12個月。
【注意事項(xiàng)】
1,、自備無水乙醇(96-100%),、自備離心管;
2、為避免其他核酸的污染,，必須使用不含DNA和RNA的離心管,、吸管、槍頭,、試劑和手套,，操作人員須戴罩;
3、避免反復(fù)凍融蛋白酶 K,，會影響其活性,。
【操作步驟】
1. 轉(zhuǎn)移20 µl 蛋白酶K至1.5ml離心管中。
2. 轉(zhuǎn)移200 µl樣品,如血清,、血漿,、尿液、培養(yǎng)液上清,、或其它無細(xì)胞體液至裝有蛋白酶K的離心管中,震蕩混勻5s,。若樣品不足200µl，用Buffer PBS或無核酶水補(bǔ)足,。（咽/口腔拭子,，或固體組織樣品先用Buffer PBS浸泡或勻漿后,離心取上清進(jìn)行操作。）
3. 加入200µl 裂解液 至步驟2的混合液中,渦旋混勻15s,室溫靜置10min,。
4. 加入250µl無水乙醇 至步驟3的混合液中,渦旋混勻15s,室溫靜置3min,。
5. 把 純化柱 裝在2ml收集管中,，轉(zhuǎn)移步驟4的混合液至純化柱中。12,000rpm離心1min,。
6. 倒棄濾液把純化柱裝回收集管中,加入650 µl 洗滌液 至純化柱中,12,000rpm離心1min,。
7. 按照步驟6重復(fù)一次。
8. 倒棄濾液把純化柱套回收集管,12,000rpm離心空柱2min甩干純化柱,。
9. 將純化柱轉(zhuǎn)移至新的1.5ml離心管,加入50µl Nuclease Free Water至純化柱的膜中央,，室溫靜置1min，12,000rpm離心1min,。離心管中即為所提取的樣品DNA/RNA,。
【常見問題】
1. 純化柱堵塞
l 樣品用量太多：處理動物抗凝血液時，樣品量控制在100-150µl,。盡量使用無細(xì)胞的樣品,，如血漿、血清,、組織勻漿液的上清等,。
l 蛋白酶 K活性下降：重新制備蛋白酶 K。使用后蛋白酶 K必須保存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,。蛋白酶 K與裂解液不能預(yù)先混合。
l 樣品含固體顆粒：在第4步加入乙醇前,，12,000rpm離心3min去除未消化的雜質(zhì),，轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管后再加入乙醇。
l 樣品裂解不充分：樣品與裂解液混勻不充分,。重新提取,，加入裂解液后先顛倒混勻3-5次，然后以高速度渦旋讓樣品與裂解液充分混勻,。
2. 下游應(yīng)用結(jié)果不理想
l 樣品被反復(fù)解凍： 避免反復(fù)凍溶樣品,。推薦使用新鮮樣品或只解凍過一次的樣品。
l 蛋白酶K活性下降：更換蛋白酶K,。使用后蛋白酶 K必須立即保存于-20℃,，避免反復(fù)凍融。
l Nuclease Free Water被污染：更換新的Nuclease Free Water或DEPC處理水,。
l 乙醇?xì)埩簦褐釉谙疵撉?，需要空甩去除乙醇。對于敏感的?yīng)用,，柱子在洗脫后,，打開柱子的蓋子,，放置10-15min讓乙醇*揮發(fā),。
l 洗脫效率：處理富含DNA的樣品時,，把Nuclease Free Water預(yù)熱至55℃后再進(jìn)行洗脫，有利于提高DNA得率,。