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人新型甲型H1N1 流感病毒
閱讀：427 發(fā)布時(shí)間：2020-4-22人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)定性檢測(cè)試劑盒（ELISA） 說(shuō)明書
使用前,，請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)定性檢測(cè)試劑盒（ELISA）
【包裝規(guī)格】
48 人份/盒,，96 人份/盒
【預(yù)期用途】
僅供科研使用，定性檢測(cè)血清、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)
的濃度,。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體 (Flu A-H1N1 IgG)抗原的微孔酶標(biāo)板中,，加入人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)陰陽(yáng)性性對(duì)照和待測(cè)樣本,，溫育洗滌，再加入另一株 HRP 標(biāo)記的抗人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)抗體（酶標(biāo)抗體）,，經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌,，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體
-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物,。加底物 A 和 B,，底物在 HRP 催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,，在終止液
（2M 硫酸）作用下,，終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度（OD 值）,，吸光度（OD 值）與待測(cè)樣品中人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)的濃度正相關(guān),，通過(guò)計(jì)算公式判斷樣品陰陽(yáng)性。
【主要組成成分】主要成分
組分 | 數(shù)量 | 主要成分 |
陰性對(duì)照 | 0.5ml/管 | 不含待測(cè)物的緩沖液 |
陽(yáng)性對(duì)照 | 0.5ml/管 | 含待測(cè)物的緩沖液 |
包被微孔板 | 48T | 預(yù)包被固相抗原 |
HRP 標(biāo)記抗體 | 3mL | HRP 標(biāo)記的檢測(cè)抗體 |
樣本稀釋液 | 3mL | 緩沖液 |
底物液 A | 3mL | 過(guò)氧化脲工作液 |
底物液 B | 3mL | TMB 工作液 |
終止液 | 3mL | 硫酸稀釋液 |
20×濃縮洗滌液 | 20mL | 含 0.15%Tween20 的 PBS |
說(shuō)明書 | 1 份 | -- |
自封袋 | 1 個(gè) | -- |
不干膠 | 2 片 | -- |
陰陽(yáng)性對(duì)照已經(jīng)通過(guò)測(cè)試,，結(jié)果表明 HBs 抗原陰性,，HIV1、HIV2 和 HCV 抗體陰性,，由于不存在一種試驗(yàn)方法能夠*保證沒(méi)有這些物質(zhì),，本品必須按照具有潛在的感染性進(jìn)行處理，處理過(guò)程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施,。
需要但未提供的材料及耗材
1,、能夠檢測(cè) 450 nm 吸光度的酶標(biāo)儀。
2,、精密移液器及一次性吸頭
3,、蒸餾水或去離子水
4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5,、37℃水浴鍋或恒溫箱
6,、1L 量筒
7、無(wú)粉一次性乳膠手套
8,、稀釋用聚丙烯試管
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1,、2-8℃保存，切勿冷凍,，有效期 6 個(gè)月,。
2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,，密閉自封袋,，并將全部試劑放回 2-8℃冰箱。
3,、開封后,，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品,、包被微孔板和 HRP 標(biāo)記抗體,，有效期為 28
天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的,。
【適用儀器】
半自動(dòng)的酶標(biāo)儀,，如 Thermo MK3，或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀,。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南,。所有樣本采集過(guò)程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑,。
1,、細(xì)胞培養(yǎng)上清：4000rpm 條件下離心 20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物,，上清液保存在-
20℃以下,，避免反復(fù)凍融。
2,、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm 條件下離心 20min,，小心地分離出血清,，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融,。
3,、血漿：肝素，EDTA,，或檸檬酸鈉作為抗凝劑,。在 4000rpm 條件下，離心 20 分鐘取上清,， 血漿保存在-20℃以下,，避免反復(fù)凍融。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在 2-8℃條件下,，可以儲(chǔ)存 72h,，或者在- 20℃儲(chǔ)存 6 個(gè)月,。樣本收集后，不是一次檢測(cè)完,，請(qǐng)按一次用量分裝凍存,，避免反復(fù)凍融,，使用時(shí)在室溫下解凍,，確保樣品均勻充分解凍。
【試劑準(zhǔn)備】
1,、使用前,，所有的組分都要至少?gòu)?fù)溫 30min，確保充分復(fù)溫到室溫,。
2,、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解,。濃縮洗滌液與蒸餾水,，按 1:20 稀釋，即 1 份的濃縮洗滌液,，添加 19 份的蒸餾水,。
3、底物：底物液 A 和 B,，在使用前,，按 1:1 體積充分混合，混合后 15 分鐘內(nèi)使用,。
操作程序
1,、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品,、質(zhì)控品和樣品,，建議做復(fù)孔。
2,、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,，配制好試劑盒各種組分的工作液。
3,、從鋁箔袋中取出所需板條,，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
4,、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、樣本孔和空白孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加待
測(cè)樣本 50μL,，空白孔不加,。
5、除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL。
6,、用封板膜蓋住反應(yīng)板,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
7,、揭開封板膜,，棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 20s，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,。
8、如此重復(fù) 4 次（共洗板 5 次）,。若使用自動(dòng)洗板機(jī),，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡 20s 的程序,，可以提高檢測(cè)的精度,。洗板結(jié)束，加底物前,，要在干凈不掉屑的紙上,，充分拍干反應(yīng)板。
9,、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合,，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 15min,。
10、所有孔加入終止液 50μL,，在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD 值）,。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
檢測(cè)完成后，以陰性對(duì)照的 OD+0.25,，做為閾值,，樣本 OD 值大于閾值,，為陽(yáng)性；樣本
OD 值低于閾值為陰性,。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1,、僅供科研使用，不得用于臨床診斷,。
2,、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過(guò)期產(chǎn)品不得使用,。
3,、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4,、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5,、如果樣本值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線zui高濃度,，請(qǐng)用檢測(cè)緩沖液稀釋樣本，并重新檢測(cè),。如果細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本需要較大的稀釋倍數(shù),，請(qǐng)用細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行適度稀釋。
6,、待測(cè)樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果,，檢測(cè)前，請(qǐng)排除該因素,。
7,、通過(guò)其他方法得到的檢測(cè)結(jié)果，與本試劑盒測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性,。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1,、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物,。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,，無(wú)破損漏氣。
2,、陰性結(jié)果
陰性對(duì)照的 OD 值不高于 0.2,。
3、陽(yáng)性結(jié)果
陽(yáng)性對(duì)照的 OD 值不低于 0.8,。
4,、特異性
本試劑盒識(shí)別天然和重組人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)，與結(jié)構(gòu)類似物無(wú)交叉,。
5,、穩(wěn)定性
2℃-8℃保存,，有效期 6 個(gè)月。
【注意事項(xiàng)】生物安全
1,、檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定,，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品,、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置,。
2、試劑盒的液體組分中,，含有 proclin-300 防腐劑,，可能引起皮膚過(guò)敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸,。
3,、底物液對(duì)皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,，避免吸入煙霧,。戴上防護(hù)手套，實(shí)驗(yàn)完成后*洗手,。
4,、試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時(shí),，請(qǐng)佩戴防護(hù)服,，及防護(hù)眼睛、手及面部的設(shè)施,。
5,、本試劑盒用于科學(xué)研究，不能用于診斷治療,。
6,、請(qǐng)不要使用其他批號(hào)或其他來(lái)源的試劑替代本試劑盒中的試劑。
技術(shù)要點(diǎn)
1,、重溶或者混合蛋白溶液時(shí),，避免起泡。
2,、加標(biāo)準(zhǔn)品與樣本時(shí),，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣,，避免交叉污染,。
3、合適的溫育時(shí)間，和充分的洗滌步驟,，是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件,。
4、底物溶液為無(wú)色液體,，保存過(guò)程中變?yōu)樗{(lán)色,，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用,。
5,、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后,，藍(lán)色底物產(chǎn)物,，會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。
6,、實(shí)驗(yàn)中,，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。
7、所有液體組分,，使用前充分搖勻，嚴(yán)格按照說(shuō)明書標(biāo)明的時(shí)間,、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作,。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料,，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序,，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類型和危險(xiǎn)性級(jí)別，進(jìn)行廢物和污物的處 理,，同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對(duì)待所有的廢物和污物,。