化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
季節(jié)性H1N1 流感病毒IgG 抗體檢測試劑盒
閱讀：720 發(fā)布時間：2020-4-20僅供科研使用,，不得用于臨床檢驗。
人季節(jié)性H1N1 流感病毒IgG 抗體(FLU-H1N1-IgG)定性檢測試劑盒（ELISA） 說明書
使用前,，請務(wù)必仔細閱讀說明書,。
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：人季節(jié)性H1N1 流感病毒IgG 抗體(FLU-H1N1-IgG)定性檢測試劑盒（ELISA）
【包裝規(guī)格】
48 人份/盒，96 人份/盒
【預(yù)期用途】
僅供科研使用,，定性檢測血清,、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中人季節(jié)性H1N1 流感病毒IgG 抗體(FLU-H1N1-IgG)
的濃度,。
【檢驗原理】
本試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。在預(yù)包被人季節(jié)性H1N1 流感病毒IgG 抗體 (FLU-H1N1-IgG)抗原的微孔酶標(biāo)板中，加入人季節(jié)性H1N1 流感病毒IgG 抗體(FLU-H1N1-IgG)陰陽性性對照和待測樣本,，溫育洗滌,，再加入另一株 HRP 標(biāo)記的抗人季節(jié)性H1N1 流感病毒IgG 抗體(FLU-H1N1-IgG)抗體（酶標(biāo)抗體），經(jīng)過溫育與充分洗滌,，去除未結(jié)合的組分,，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體
-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底物 A 和 B,，底物在 HRP 催化下,，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液
（2M 硫酸）作用下，終轉(zhuǎn)化為黃色,，在酶標(biāo)儀上測定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）與待測樣品中人季節(jié)性H1N1 流感病毒IgG 抗體(FLU-H1N1-IgG)的濃度正相關(guān),，通過計算公式判斷樣品陰陽性,。
【主要組成成分】主要成分
組分 | 數(shù)量 | 主要成分 |
陰性對照 | 0.5ml/管 | 不含待測物的緩沖液 |
陽性對照 | 0.5ml/管 | 含待測物的緩沖液 |
包被微孔板 | 48T | 預(yù)包被固相抗原 |
HRP 標(biāo)記抗體 | 3mL | HRP 標(biāo)記的檢測抗體 |
樣本稀釋液 | 3mL | 緩沖液 |
底物液 A | 3mL | 過氧化脲工作液 |
底物液 B | 3mL | TMB 工作液 |
終止液 | 3mL | 硫酸稀釋液 |
20×濃縮洗滌液 | 20mL | 含 0.15%Tween20 的 PBS |
說明書 | 1 份 | -- |
自封袋 | 1 個 | -- |
不干膠 | 2 片 | -- |
陰陽性對照已經(jīng)通過測試，結(jié)果表明 HBs 抗原陰性,，HIV1,、HIV2 和 HCV 抗體陰性，由于不存在一種試驗方法能夠*保證沒有這些物質(zhì),，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理,，處理過程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。
需要但未提供的材料及耗材
1,、能夠檢測 450 nm 吸光度的酶標(biāo)儀,。
2、精密移液器及一次性吸頭
3,、蒸餾水或去離子水
4,、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6,、1L 量筒
7,、無粉一次性乳膠手套
8、稀釋用聚丙烯試管
【儲存條件及有效期】
1,、2-8℃保存,，切勿冷凍，有效期 6 個月,。
2,、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,，密閉自封袋,，并將全部試劑放回 2-8℃冰箱。
3,、開封后,，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品,、包被微孔板和 HRP 標(biāo)記抗體,，有效期為 28
天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的,。
【適用儀器】
半自動的酶標(biāo)儀,，如 Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
樣本類型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南,。所有樣本采集過程中,，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1,、細胞培養(yǎng)上清：4000rpm 條件下離心 20min,，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在-
20℃以下,，避免反復(fù)凍融,。
2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，4000rpm 條件下離心 20min，小心地分離出血清,，保存在- 20℃以下,，避免反復(fù)凍融。
3,、血漿：肝素,，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑,。在 4000rpm 條件下,，離心 20 分鐘取上清， 血漿保存在-20℃以下,，避免反復(fù)凍融,。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在 2-8℃條件下，可以儲存 72h,，或者在- 20℃儲存 6 個月,。樣本收集后，不是一次檢測完,，請按一次用量分裝凍存,，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍,，確保樣品均勻充分解凍,。
【試劑準(zhǔn)備】
1、使用前,，所有的組分都要至少復(fù)溫 30min,，確保充分復(fù)溫到室溫。
2,、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液,，會有結(jié)晶產(chǎn)生,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解,。濃縮洗滌液與蒸餾水，按 1:20 稀釋,，即 1 份的濃縮洗滌液,，添加 19 份的蒸餾水。
3,、底物：底物液 A 和 B,，在使用前,，按 1:1 體積充分混合,，混合后 15 分鐘內(nèi)使用。
操作程序
1,、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫,，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品,，建議做復(fù)孔,。
2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法,，配制好試劑盒各種組分的工作液,。
3、從鋁箔袋中取出所需板條,，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱,。
4、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、樣本孔和空白孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加待
測樣本 50μL,，空白孔不加,。
5、除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的檢測抗體 100μL。
6,、用封板膜蓋住反應(yīng)板,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
7,、揭開封板膜,，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置 20s,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,。
8,、如此重復(fù) 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動洗板機,，請按洗板機操作程序進行洗板,，添加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測的精度,。洗板結(jié)束,，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上,，充分拍干反應(yīng)板,。
9、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合,，所有孔中加入底物混合液 100μL,。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 15min,。
10,、所有孔加入終止液 50μL，在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD 值）,。
【檢驗結(jié)果的解釋】
檢測完成后,，以陰性對照的 OD+0.25，做為閾值,，樣本 OD 值大于閾值,，為陽性；樣本
OD 值低于閾值為陰性,。
【檢驗方法的局限性】
1,、僅供科研使用，不得用于臨床診斷,。
2,、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用,。
3,、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4,、使用試劑盒配套的樣品稀釋液,。
5,、如果樣本值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線高濃度，請用檢測緩沖液稀釋樣本,，并重新檢測,。如果細胞培養(yǎng)上清樣本需要較大的稀釋倍數(shù)，請用細胞培養(yǎng)基進行適度稀釋,。
6,、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果，檢測前,，請排除該因素,。
7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果,，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性,。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明,、無沉淀或者絮狀物,。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝,，無破損漏氣,。
2、陰性結(jié)果
陰性對照的 OD 值不高于 0.2,。
3,、陽性結(jié)果
陽性對照的 OD 值不低于 0.8。
4,、特異性
本試劑盒識別天然和重組人季節(jié)性H1N1 流感病毒IgG 抗體(FLU-H1N1-IgG),，與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。
5,、穩(wěn)定性
2℃-8℃保存,，有效期 6 個月。
【注意事項】生物安全
1,、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定,，嚴格防止交叉污染，所有樣品,、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進行處置,。
2、試劑盒的液體組分中,，含有 proclin-300 防腐劑,，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸,。
3,、底物液對皮膚,、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧,。戴上防護手套,，實驗完成后*洗手。
4,、試劑盒中的終止液為酸性溶液,，在使用終止液時，請佩戴防護服,，及防護眼睛,、手及面部的設(shè)施。
5,、本試劑盒用于科學(xué)研究,，不能用于診斷治療。
6,、請不要使用其他批號或其他來源的試劑替代本試劑盒中的試劑,。
技術(shù)要點
1、重溶或者混合蛋白溶液時,，避免起泡,。
2、加標(biāo)準(zhǔn)品與樣本時,，每個標(biāo)準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭,，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染,。
3,、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟,，是保證實驗結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件,。
4、底物溶液為無色液體,，保存過程中變?yōu)樗{色,，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用,。
5,、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后,，藍色底物產(chǎn)物,，會瞬間變?yōu)辄S色。
6,、實驗中,，用剩的板條,，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。
7,、所有液體組分，使用前充分搖勻,，嚴格按照說明書標(biāo)明的時間,、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑,，所有污染性的一次性材料,，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個實驗室都有責(zé)任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別,，進行廢物和污物的處 理,，同時要嚴格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。