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  小鼠心肌成纖維細(xì)胞的組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常心臟組織,，心臟是脊椎動(dòng)物身體中重要的一個(gè)器官,，主要功能是提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng),，向器官,、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳,、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等）,，使細(xì)胞維持正常的代謝和功能,。
       心臟中，心肌成纖維細(xì)胞約占正常心肌組織細(xì)胞總數(shù)的60%-70%,，是心臟中非心肌細(xì)胞的主要組成部分,，廣泛存在于心臟組織中，包圍心肌細(xì)胞,，連接心肌細(xì)胞間質(zhì),，與缺血性心臟病、炎癥,、肥大,、梗死等病理狀態(tài)密切相關(guān)。細(xì)胞生長(zhǎng)方式以長(zhǎng)梭狀細(xì)胞,，貼壁培養(yǎng),。

      小鼠心肌成纖維細(xì)胞的方法有很多，賽百慷提供的心肌成纖維細(xì)胞分離方法有兩種,，一種是貼塊法,，一種是消化法，這兩種方法都可以用于分離和培養(yǎng)原代細(xì)胞,。
       實(shí)驗(yàn)器械：
       1.培養(yǎng)皿
       2.T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
       3.100目不銹鋼網(wǎng)篩
       4.200目不銹鋼網(wǎng)篩
       5.眼科剪
       6.眼科鑷
       7.離心管（15ml,、50ml）

       實(shí)驗(yàn)分離和培養(yǎng)步驟：

       1. 小鼠頸椎脫臼處死后，剃除腹胸部的被毛,，放入裝有75%酒精的燒杯中浸泡5min,。

       2. 取出小鼠，在無菌環(huán)境下打開胸腔,，取出心臟組織,，注入盛有無菌1×PBS的培養(yǎng)皿中，洗凈組織表面的血液,。

       3. 將清洗干凈的心臟組織轉(zhuǎn)入裝有75%酒精的培養(yǎng)皿中浸泡15s以殺死大多數(shù)的心臟被膜細(xì)胞,，浸泡完成后立即轉(zhuǎn)入裝有無菌1×PBS的培養(yǎng)皿中震蕩清洗。

       4. 清洗完成后,，用剪刀鑷子配合除去主動(dòng)脈弓和心房組織,，僅保留心室部分,，再次用1×PBS清洗去除心室內(nèi)的血液。

       5. 將清洗干凈的心室組織用剪刀減成1mm3大小左右的碎塊,，之后用PBS清洗若干次后按下述兩種方法之一進(jìn)行后續(xù)操作,。

       A.貼塊法

       6. 將清洗好的碎塊轉(zhuǎn)入另一培養(yǎng)皿中，用0.25%胰蛋白酶消化液浸泡組織,，室溫消化3-5min,。

       7. 消化完成后，添加數(shù)毫升FBS終止消化,，之后吸棄液體,，加PBS清洗組織塊1伺次后，用200ul吸頭將組織塊平均接種于T-25培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)面上,，之后將培養(yǎng)瓶放置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中,，靜置2-4h。

       8. 待組織處于略微脫水的狀態(tài)時(shí),，小心添加2ml*培養(yǎng)基,，添加時(shí)注意盡量不要將組織塊沖起，要使培養(yǎng)基接觸所有的組織塊,。

       9. 之后放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),，一般2-4天后成纖維細(xì)胞會(huì)從組織塊周圍爬出，待爬出的細(xì)胞有較多數(shù)量時(shí),，可將細(xì)胞消化下來，去除組織塊,，轉(zhuǎn)入另一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),。

       B.消化法

       6. 將清洗好的碎塊轉(zhuǎn)入另一離心管中，加入混合消化液（0.08%胰酶+0.06%Ⅱ型膠原酶）37℃水浴消化8min后,，吸取上層混懸液棄去,。

       7. 余下組織加入混合消化液10ml，37℃水浴震蕩消化10min,；吸取上層懸液至另一離心管中,，加入適量FBS終止反應(yīng)；剩余沉淀物再加消化液消化3-5次,，直至組織塊*消化,。

       8. 按1∶1加入含血清的培養(yǎng)基，中止酶反應(yīng),，懸液過150目網(wǎng)篩去除較大的組織塊,。

       9. 收集全部中止后的消化液于離心管中，300g,，離心10 min,，棄去上清,，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞后計(jì)活細(xì)胞數(shù)。

      10. 調(diào)整細(xì)胞密度以1× 106個(gè)/ml 接種入的T-25培養(yǎng)瓶中,，每瓶添加2ml細(xì)胞懸液,。

      11. 培養(yǎng)瓶放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中靜置40min后,，吸棄上清液以去除未貼壁的非成纖維細(xì)胞和死細(xì)胞,，再添加5ml*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。