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人單純皰疹病毒 I 型熒光定量 PCR 檢測(cè)試劑盒（染料法）
閱讀：420 發(fā)布時(shí)間：2019-9-25產(chǎn)品及特點(diǎn) 單純皰疹病毒（Herpes Simple Viruses， HSV）屬于皰疹病毒科 a 病毒亞科，
為雙股 DNA 病毒，皰疹病毒感染的宿主范圍廣泛,，可感染人類和其他脊椎動(dòng)物。對(duì)人
的感染通過(guò)人與人接觸傳染,。根據(jù)抗原性的差別目前把 HSV 分為 1 型和 2 型,。1 型主
要由口唇病灶獲得，2 型可從生殖器病灶分離到,。從發(fā)生后四個(gè)月到數(shù)年被感染的人數(shù)
可達(dá)人口總數(shù)的 50-90%,，是易感染人的一種病毒。因此對(duì) HSV-1 的快速診斷具有
重要的意義,。本產(chǎn)品就是根據(jù) HSV-1 保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR
產(chǎn)品。本試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1. 根據(jù) HSV-1 的 gD 基因設(shè)計(jì)的專一性引物,，與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng),。
2. 靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個(gè)數(shù)量級(jí)，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng),。
3. 即開(kāi)即用,，用戶只需要提供樣品模板，操作簡(jiǎn)單,，定量準(zhǔn)確快速,。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè)，避免后續(xù)污染,。
5. 本試劑盒足夠 100 次 20uL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR,。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷,。
規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 十孔盒包裝（去紙托）
2×qPCR MagicMix 90408 1 mL（棕色,，裝 A 袋）
超純水 100935 1 mL（紅蓋，裝 A 袋）
引物 11-180802F 11-180802f 1 OD（本色,，裝 B 袋）
引物 11-180802R 11-180802r 1 OD（本色,，裝 B 袋）
HSV-1 陽(yáng)性對(duì)照
(1×10E8 copy/μL)
11-180802pc 50 μL（白蓋，裝 C 袋）
DNA 病毒裂解液（試用裝） 3674a 15 次（9 mL）
使用手冊(cè) 11-180802sc 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,、-20℃保存(A 袋和 B 袋的試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū),、C 袋的陽(yáng)性對(duì)照分開(kāi)放置)，
有效期一年,。
自備試劑 DNA 模板,、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定,，具體見(jiàn)使用方法）。
使用方法 一,、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化樣品的 DNA,，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。也可以選購(gòu)本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級(jí)版柱式病毒 DNAout,。本 試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）
二,、引物的制備（在樣品制備室進(jìn)行）
2. 按引物標(biāo)簽提示在裝引物干粉的管中直接加入適量的超純水（加入量見(jiàn)引物試管上
的標(biāo)簽），使得兩條引物的濃度均為 10μM（10 pmol/μL）,，然后各取 110μL 混合在一起得 220μL,，標(biāo)注為引物混合物，放冰上待用,。220μL 足夠 100 次 qPCR 反應(yīng),。
三、稀釋陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例,。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，
因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成 分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照， 只提供可以直接使用的長(zhǎng)為 52bp 的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照,。
3. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 7，6,，5,，4，3,，2,。
4. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）,。
5. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,，充分震蕩 1 分鐘，得
1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。
6. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),， 充分震蕩 1 分鐘,，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用,。
7. 換槍頭,，從 6 號(hào)管中取 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中,，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。
8. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 4 號(hào)管中,，得
1×10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用。
9. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照,。放冰上待用,。 三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
10. 在 PCR 管中加入下列成分（待測(cè)樣品需要做三次重復(fù),，下表只列出一次。樣品管 和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照,，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子 儲(chǔ)存好后后加）：
成分 樣品 陰性對(duì)照 陽(yáng)性對(duì)照（2-7 管）
2×qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各 10 μL
引物混合物 2 μL 2 μL 各 2 μL
自備 10×ROX (見(jiàn)注) 2 μL 2 μL 各 2 μL
待測(cè)樣品 DNA 模板 1-5 μL 不加 不加
陽(yáng)性對(duì)照（2-7 號(hào)）
不加
不加 各 5μL（2 號(hào)樣到
2 號(hào)管,，3 號(hào)樣到 3 號(hào)管…）
補(bǔ)水到 20 μL 20 μL 20 μL
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照,，其他熒光 PCR 儀