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HIV-2 前病毒 PCR 試劑盒
閱讀：322 發(fā)布時間：2019-9-24產(chǎn)品及特點(diǎn) 牛細(xì)小病毒(Bovine Parvovirus,BPV) 會引發(fā)牛細(xì)小病毒感染,，是一種接觸性傳染病,以下痢為主要癥狀,其特征是母牛生殖機(jī)能障礙,，導(dǎo)致妊娠母牛感染導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎,，犢牛感染則表現(xiàn)腸炎,、腹瀉。牛細(xì)小病毒感染在牛群中發(fā)生比較廣泛,，目前國內(nèi)外對其研究的較少,發(fā)生此病的國家也不多，本產(chǎn)品就是以染料法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測牛細(xì)小病毒的試劑盒,，它具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用,，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,，靈敏性高,。
3.提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品,。
4.特異性高,，引物是根據(jù)牛細(xì)小病毒高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他病毒的DNA發(fā)生交叉反應(yīng),。
5.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng),。
6.本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分 成分 編號 十孔盒包裝
2×Probe qPCR MagicMix 190303 0.5 mL（本色蓋）
熒光PCR模板稀釋液 180701 1 mL（黃蓋）
牛細(xì)小病毒 PCR引物 15-44000yw 100 μL（白蓋）
牛細(xì)小病毒 qPCR探針 15-44000pro 100 μL（棕色管）
牛細(xì)小病毒陽性對照2.0
(1×10E8拷貝/μL) 15-44000pc 50 μL（紅蓋）
天凈沙核酸釋釋劑試用裝 61202 50次（2.5mL）
使用手冊 15-44000sc 1份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，保存期限為12個月。
自備試劑 樣品DNA,。
使用方法 一,、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）,。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照,。
1.標(biāo)記6個離心管，分別為7,，6,，5，4,，3,，2。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液,，用帶芯槍頭,，下同）。
3.在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),，充分震蕩1分鐘,，得1×10E7拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
4.換槍頭,，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘,，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用。
5.換槍頭,，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。放冰上待用,。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用,。
二,、樣品DNA的制備
7.如果有N個樣品，設(shè)置N+2個提取,，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照）,，一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,，以此作為PC。另外用水作為NC,。
8.用自選方法純化樣品的DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容,。也可以選購本公司的柱式病毒DNAout。本試劑盒免費(fèi)贈送50次免DNA提取的天凈沙核酸釋放劑試用裝,，該釋放劑的裂解液可以直接作為PCR模板,，省略了DNA提取步驟。
三,、Probe qPCR反應(yīng)（20μL體系,，在樣品制備室進(jìn)行）
9.如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管,，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,，1個用于PCR陰性對照，6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品,。
10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù),。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加）：
成分 樣品管
N+2個 PCR陰性對照管 標(biāo)準(zhǔn)曲線
樣品管（2-7管）
2×Probe qPCR MagicMix 10 μL 10 μL 各10 μL
牛細(xì)小病毒 qPCR探針 2 μL 2 μL 各2 μL
牛細(xì)小病毒 PCR引物混合液 2 μL 2 μL 各2 μL
待測樣品DNA模板 6 μL 不加 不加
第7步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液（2-7號） 不加 不加 各6μL（2號樣到2號管,，3號樣到3號管…）
11.蓋上蓋子后上機(jī),，按下面參數(shù)進(jìn)行PCR：
過程 溫度 時間
預(yù)變性 94℃ 5 min
PCR反應(yīng)
（40個循環(huán)） 94℃ 0.5 min
55℃ 0.5 min（采集FAM通道的熒光信號）
72℃ 0.5 min
后延伸 72℃ 10min
12.如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸,，以Ct值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,，再推算出其濃度,。
13.如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性,，則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,，有典型擴(kuò)增曲線,，Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品,，如果其Ct大于或等于40則為陰性,，如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,，則重復(fù)一次,。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40,，則為陽性,。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 牛細(xì)小病毒可視化LAMP檢測試劑盒