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技術(shù)文章

免提PCR試劑盒

閱讀:358          發(fā)布時間:2019-9-5

產(chǎn)品及特點 本產(chǎn)品是可以直接用新鮮的動物,、植物、細(xì)菌樣品的裂解液進行PCR 擴增的試劑
盒,,它具有下列特點:
1. 操作簡單,,免去DNA 提取、蛋白去除,、RNA 去除等步驟,,15 分鐘即得用于PCR
的模板,一個實驗員每天可以篩選上千個樣品,,尤其適用于大規(guī)模育種篩選和臨床
篩選,。
2. 兼容性廣,可以用于幾乎所有的分子生物學(xué)樣品,,包括細(xì)菌,、昆蟲、真菌,、各種植
物,、各種動物,、法醫(yī)樣品(包括全血液、血痕,、精斑、唾液,、毛發(fā),、組織樣品、口
腔細(xì)胞和FTA 卡),、石蠟組織切片等,。
3. 成本低廉,從提取到PCR 處理每個樣品的成本才一元左右,,在大規(guī)模篩選時能節(jié)
約成本,。
4. 環(huán)保健康,不使用任何有毒有害的試劑,。
5. 本試劑盒足夠處理400 份樣品,,足夠400 次20uL 體系的PCR。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 十孔盒包裝
免提PCR 溶液A 成分一 13098 400 uL(白色蓋)
免提PCR 溶液A 成分二 130985b 800 uL(綠色蓋)
免提PCR 溶液B 130985c 1 mL×4(紅色蓋)
PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL×4(黃色蓋)
使用手冊 130985sc 1 份
運輸及保存 低溫運輸,,溶液A 成分一和成分二,、溶液B 可以常溫放置,PCR MagicMix 3.0 需要
-20℃保存,。有效期一年,。
自備試劑 PCR 引物和模板,超純水
使用方法 1. 配制溶液A 工作液,。以配制1mL 工作液(足夠10 個樣品)為例:在一干凈塑料
管中加入10uL 溶液A 成分一,,20uL 溶液A 成分二和970uL 超純水,充分混合
均勻即可,。溶液A 工作液可室溫放置,,但在一周內(nèi)用完,不要長期放置,。一
次檢測一個樣品需要100uL 溶液A 工作液,,1mL 工作液足夠10 個樣品。如果待
測樣品數(shù)量為其他數(shù)字,,配制的溶液A 工作液的體積需要做相應(yīng)的調(diào)整,。
2. 根據(jù)材料不同參考下表取少量樣品到一干凈的塑料離心管中。
樣品種類 取用量
動物組織 1-5 mg
鼠尾 2mm 長
血液樣品 不超過20 uL
植物葉片 1-5 mg
植物種子(去皮) 1-5 mg
酵母培養(yǎng)物 0.2-0.5mL 培養(yǎng)物沉淀
細(xì)菌培養(yǎng)物 0.2-0.5mL 培養(yǎng)物沉淀
注意:未列出樣品,,用戶需要自己摸索用量,。對富含多醌多酚的植物材料(如棉花),
組織使用量不要超過0.5mg,。
3. 加入100 uL 溶液A 工作液,,確保樣品被溶液淹埋,。
4. 95℃保溫10 分鐘。
5. 待冷卻到常溫后加入10uL 溶液B 并混勻得細(xì)胞裂解液,。
6. 直接用裂解液作為模板設(shè)置30 uL 體系的PCR 反應(yīng)體系如下:
成分 用量
PCR MagicMix 3.0 10 uL
細(xì)胞裂解液(來于上步) 1-2 uL
自備PCR 引物1(10uM) 1 uL
自備PCR 引物2(10uM) 1 uL
補水到 20 uL
注意:裂解液體積不要超過PCR 體積的1/10,。
7. 放入PCR 儀中進行PCR,PCR 參數(shù)需要根據(jù)引物Tm 值和靶分子長度等參數(shù)設(shè)
置,。一般不低于35 次循環(huán),。
8. PCR 結(jié)束后取5-10 uL 直接上樣電泳(本產(chǎn)品不需要上樣液即可直接上樣),紅
色染料電泳速度相當(dāng)于50 bp DNA 片段,。
9. 如果沒有預(yù)期的擴增,,細(xì)胞裂解液中可能是有PCR 抑制劑(植物、土壤和血液等
DNA 樣品常含此類抑制物),,建議把細(xì)胞裂解液分別稀釋10 倍和100 倍再用3uL
進行PCR 擴增,。也可以在PCR 體系中加入1/10 的本公司的PCR 抑制物清除劑
(CAT#:60804,30uL 體系中加3uL,。需要另購),,可能會對PCR 有幫助。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 免RNA 提取RT-PCR 試劑盒

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