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非洲豬瘟(African Swine Fever,、ASF)是由非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus、ASFV) 引起豬的一種急性,、熱性,、高度接觸傳染性疾病，病死率幾乎高達 100%,，ASF 近在我國爆發(fā),，給我國養(yǎng)豬業(yè)造成重大損失，因此ASFV 的快速準確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用,，為此本公司開發(fā)了簡單快捷的 ASFV 可視化 LAMP 檢測試劑盒,，它具有下列特點：
1.即開即用，用戶只需要提供病毒樣品,。
2.用 LAMP 恒溫擴增法擴增 ASFV 特異片段,，不需要熒光 PCR 等貴重儀器同時擴增時間只需要 1 小時，尤其適合現(xiàn)場或?qū)嶒灄l件簡陋的單位使用,。
3.檢測靈敏性比PCR 高 10 倍以上,。
4.特異性高，由于使用四條針對 ASFV 保守基因的特異引物,，比使用 2 條引物的PCR 專一性更高,。
5.可視化，由于 LAMP 中含可視化染料,，擴增后可以在不開蓋的條件下直接肉眼觀察結(jié)果,，減少對儀器設(shè)備的依賴和對后續(xù)實驗的污染。
6.整合UNG-dUTP 防污染系統(tǒng),，可以防止實驗污染這一非常棘手的問題（尤其在實驗條件不規(guī)范的場合）,。
7.提供無傳染性的陽性對照，便于分析實驗結(jié)果,。
本試劑盒足夠做 50 次 20μL 體系的 LAMP 擴增,。
本產(chǎn)品只能用于科研
規(guī)格及成分        成    份    編號    十孔盒包裝
        2×可視化UNG-LAMP MagicMix    180703a    500μL（綠蓋）
        非洲豬瘟病毒 LAMP 引物混合液    16-23000yw    200μL（白蓋）
        非洲豬瘟病毒 LAMP 陽性對照
（1×10E8 拷貝/μL）    60908-23000pc    50μL（紅蓋）
        天凈沙 DNA 釋放劑（試用裝）    130982    50 次
        使用手冊    13-23000sc    1 份
    免費贈送的天凈沙 DNA 釋放劑試用裝的成分和規(guī)格如下：
        成 份    編 號    十孔盒包裝    
        免 DNA 提取溶液 A 成分一    130981    30μL（白蓋）    
        免 DNA 提取溶液 A 成分二    130982    60μL（本色蓋）    
        免 DNA 提取溶液 B    130985b    300μL（紅蓋）    
運輸及保存    低溫運輸，-20℃保存,，保存期限為一年,。非洲豬瘟病毒陽性對照 2.0 單
獨放置，不要污染其他試劑,。
自備試劑    待測樣品,。

使用方法一、樣品DNA 的制備1. 用自選方法純化病毒樣品DNA,，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA 提取試劑盒兼容,，包括本公司的一管式病毒DNAout 或其升級版柱式病毒DNAout。本試劑盒免費贈送30 次天凈沙DNA 釋放劑試用裝,，通過搜索產(chǎn)品名稱或產(chǎn)品編號130982 下載,。2. 如果有N 個樣品，則需要做N+2 個樣品制備,，包括一個樣品制備陽性對照（PC）和一個樣品制備陰性對照（NC）,。樣品使用量根據(jù)所選擇的試劑盒決定。如果樣品使用量為XmL,，則在XmL 水中加10μL 非洲豬瘟病毒陽性對照作為PC,。直接用X mL 水作為NC，然后和N 個樣品一起進行病毒DNA 提取操作,。二,、LAMP（20μL 體系）3. 反應(yīng)設(shè)置：如果有N+2 個DNA 純化樣品，則設(shè)置N+4 個LAMP 擴增,，增加一個LAMP 陰性對照和LAMP 陽性對照,。在N+2 個PCR 管中加入下列成分：         4. 混勻，此時反應(yīng)液呈現(xiàn)非常淺的綠色,，由于是否有反應(yīng)是跟陰性對照和反應(yīng)前對比,，所以一定要設(shè)置陰性對照，并且反應(yīng)前要手機照相留存以供反應(yīng)后比對,。5. 置于25℃5分鐘（讓UNG滅活可能的LAMP的污染）,，然后放63℃擴增60-120分鐘（如果不使用Loop引物，則保溫2小時）,。如果是在PCR儀中保溫,，必須加熱蓋。如果用金屬浴保溫,，沒有熱蓋,，必須在孔中加水以填充孔和管子間的空隙，并且在管中加50uL石蠟油,，否則保溫期間反應(yīng)體系的水分會蒸發(fā),，影響反應(yīng)效率）。80℃10分鐘滅活Bst DNA聚合酶和UNG酶,。
  9. 如果需要也可以電泳確認實驗結(jié)果：取 10μL LAMP 擴增產(chǎn)物直接進行 2%瓊脂糖凝膠電泳（本產(chǎn)品不需要單獨加 loading buffer）,，使用 100 bpDNA Marker,。如果樣品為陽性，將會得到長度為200bp 的梯形擴增產(chǎn)物,。典型的電泳結(jié)果見下表（奇數(shù)樣為陰性結(jié)果,，偶數(shù)樣為陽性結(jié)果。此處的9 號和 10 號跟上步照片中的 9 號和 10 號是相同的兩個樣品）：    非洲豬瘟病毒熒光定量 PCR 試劑盒

 

非洲豬瘟病毒可視化LAMP試劑盒