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蛋白酪氨酸磷酸酶免疫組化試劑盒
閱讀：329 發(fā)布時間：2019-8-6產(chǎn)品名稱：蛋白酪氨酸磷酸酶免疫組化試劑盒
保存條件：不使用時取試劑盒中一抗保存-20℃,，其他均保存 2-8 ℃
試劑盒特點：該試劑盒具有靈敏度高,，特異性強(qiáng),、背景清晰、成本低廉等特點,，是理想的免疫組化染色試劑盒,。適用于冷凍切片、石蠟切片及固定的細(xì)胞涂片,，可用于檢測細(xì)胞,、組織內(nèi)的特異性抗原。
溫馨提示：本檢測試劑盒適用于人,、大小鼠,，兔等絕大多數(shù)組織，但對于內(nèi)源性生物素含量比較豐富的組織（如腎臟,、肝臟等）,，應(yīng)選用非生物素檢測系統(tǒng)，或用avdin 封閉,。
蛋白酪氨酸磷酸酶免疫組化試劑盒
試劑盒所含試劑：
1,、貨號：YS-0182R ，Rab a PTP,，50ul（應(yīng)用：IHC-P及IHC-F=1:400-800 ）
2,、貨號：SP-0023 ，3% H2O2去離子水（無色）6ml（內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑）
3,、貨號：SP-0023-A,，Blocking Solution（藍(lán)色）6ml（封閉用正常山羊血清工作液）
4、貨號：SP-0023-B Go Anti-Rb IgG/Bio（黃色）6ml（二抗工作液生物素標(biāo)記羊抗兔IgG）
5,、貨號：SP-0023-C,，Streptavidin/HRP （橙色）6ml（辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液）
6、貨號：C02-04001,，DAB顯色液 B液（20×） 20ml
7,、貨號：C02-04002,，DAB 顯色液 A液（20×） 1ml
8、貨號：C01-04001 ,，抗體稀釋液 30ml
用戶自備試劑（用戶自行購買,，亦可咨詢我公司客服購買）：
一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)緩沖液：
PBS（phosphate buffered solution）即磷酸鹽緩沖液,，能夠提供相對穩(wěn)定的離子環(huán)境和pH緩沖能力,，是生物學(xué)中經(jīng)常使用的緩沖鹽溶液，用于分子克隆及細(xì)胞培養(yǎng)等,，pH為7.2-7.4,，與人體血液等滲，主要成分為磷酸二氫鉀,、磷酸氫二鈉,、氯化鈉以。
二,、檸檬酸鈉抗原修復(fù)液：
可以用于石蠟切片,、冰凍切片等樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù),?？梢杂行コ╊惞潭ㄔ噭?dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位,，從而大大改善免疫染色效果,。
抗原修復(fù)方法：
方法1：沸水浴修復(fù)，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于沸水浴環(huán)境,，保持外部沸騰狀態(tài)15min,，自然冷卻至室溫。
方法2：微波修復(fù),，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于微波爐中,，高火5min，?；?min,，中火5min，自然冷卻至室溫,。
方法3：高壓修復(fù),，將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于高壓鍋，上汽后修復(fù)2-5min,，然后將高壓鍋置入涼水中,，減壓至正常后取出玻片
蛋白酪氨酸磷酸酶免疫組化試劑盒
抗原修復(fù)注意事項：
1）脫蠟水化的切片，應(yīng)避免因切片干燥,，而至非特異性染色,。
2）熱修復(fù)操作時務(wù)必謹(jǐn)慎,，當(dāng)心燙傷。
3）熱修復(fù)時間過長易導(dǎo)致脫片,，請注意控制時間,。
三、DAB（二氨基聯(lián)苯胺）染色液：
過氧化物酶將使底物發(fā)生反應(yīng),，于反應(yīng)部位產(chǎn)生棕色沉淀物,。標(biāo)本顯色時間一般為室溫 5~20分鐘，請在顯微鏡下觀察顯色況,，顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時脫水封固,。
實驗前準(zhǔn)備：
一）一抗稀釋的準(zhǔn)備：
本試劑盒中一抗稀釋液適用于免疫組織化學(xué)與免疫印跡等實驗一抗的稀釋，產(chǎn)品添加了抗體保護(hù)劑,、穩(wěn)定劑等成分,，有效增加了稀釋后一抗的穩(wěn)定性，減少抗體非特異性吸附,。
使用說明：按照抗體推薦效價（或個人優(yōu)化條件）,，將適量抗體加入抗體稀釋液即可,。例如,，效價為1：100時，可將10ul抗體加入到1ml抗體稀釋液中,，充分混勻后即可使用,。抗體現(xiàn)用現(xiàn)稀釋,，稀釋后的抗體2-8℃可以短期保存,，但抗體的效價會隨時間而降低。,。
二）DAB顯色液的制備實驗準(zhǔn)備：在1毫升顯色液B液（DAB 底物液）中,，加入1滴（約50微升）顯色液A液（DAB濃縮液），混合均勻,，即配成DAB工作液,。此溶液必須現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后避光保存,，6小時內(nèi)使用,，剩余的液體應(yīng)棄去。標(biāo)本顯色時間一般為室溫 5~20分鐘,，請在顯微鏡下觀察顯色的情況,，顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時脫水封固。
實驗步驟（建議方案）：
1,、石蠟切片,，常規(guī)脫蠟至水
2,、蒸餾水沖洗，pbs 浸泡5 分鐘（如需采用抗原修復(fù),，在此步驟后進(jìn)行）,。
3、3%雙氧水（H2O2）去離子水（無色液體）孵育15-20 分鐘,，以消除內(nèi)源性過氧物酶活性,。
4、滴加試劑A（藍(lán)色液體）室溫孵育15-20 分鐘,，傾去,，勿洗。
5,、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,，37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。
6,、PBS 沖洗,，3 分鐘3 次。
7,、滴加試劑B（黃色液體）,，室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
8,、PBS 沖洗,，3 分鐘3 次。
9,、滴加試劑C（橙色液體）,，室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
10,、PBS 沖洗,，3 分鐘3 次。
11,、顯色劑顯色（DAB 或AEC）
12,、自來水充分沖洗。
13,、如果需要,，可進(jìn)行復(fù)染，脫水,，透明,。
14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>蛋白酪氨酸磷酸酶免疫組化試劑盒