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人B族鏈球菌(Strep-B)試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍：                                                           96T
7.5ng/L -240 ng/L

使用目的：
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中B族鏈球菌(Strep-B)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人B族鏈球菌(Strep-B)水平,。用純化的人B族鏈球菌(Strep-B)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入B族鏈球菌(Strep-B),，再與HRP標記的B族鏈球菌(Strep-B)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的B族鏈球菌(Strep-B)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人B族鏈球菌(Strep-B)濃度,。
試劑盒組成
 

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	1
2	酶標試劑	1	8	標準品（480ng/L）	1
3	酶標包被板	8	9	標準品稀釋液	1
4	樣品稀釋液	1	10	說明書	1份
5	A	1	11	封板膜	2張
6	B	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求 
1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

240ng/L	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
120ng/L	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
60ng/L	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
30ng/L	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
15ng/L	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

人B族鏈球菌(Strep-B)試劑盒說明書

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：

計算
  以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6個月
人B族鏈球菌(Strep-B)試劑盒說明書