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貼壁細(xì)胞細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，繼續(xù)生長的空間不足，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成份也消耗較多，同時代謝廢物也有較多堆積,，需要分瓶培養(yǎng)，對細(xì)胞進(jìn)行傳代擴(kuò)增,。

對于貼壁不太緊的細(xì)胞如293,，可以直接吹散后分瓶。而對于貼壁較緊的細(xì)胞如CHO,，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶,，一般過程為 （以下操作均按無菌操作的要求進(jìn)行）：

將長成致密單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶中原來的培養(yǎng)液棄去；

加入0.25%胰酶溶液,，視細(xì)胞瓶的大小加入體積為0.5ml或更多,，以使充分浸潤；

一般消化時間約為1至3分鐘,，肉眼觀察瓶壁半透明的細(xì)胞層,，當(dāng)見到出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時,，棄去胰酶溶液,，并加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化；

視實驗要求分入多瓶繼續(xù)培養(yǎng),，一般為一傳二到一傳四的比例,。

這里，胰酶消化的程度是一個關(guān)鍵：消化過度則對細(xì)胞的活性損傷較大,，并有部分細(xì)胞漂浮,，隨棄去的胰酶流失；消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下,，反復(fù)吹打同樣也會損傷細(xì)胞活性,。

影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件,、凍存或4℃保存時間長短,、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時間及溫度等）,、消化時的溫度（氣溫,、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等。以筆者的經(jīng)驗,，以輕吹或加培養(yǎng)液后輕搖可下較好,，但對于經(jīng)驗不太充分的實驗者而言是較難判斷掌握的。 下面將細(xì)胞生長及不同消化程度的光學(xué)顯微鏡照片列出以供參考,。

所用細(xì)胞為CHO貼壁細(xì)胞,，培養(yǎng)基為含10%小牛血清的DMEM-F12,，倒置顯微鏡10X40，數(shù)碼相機(jī)300萬像素,。

取細(xì)胞凍存管一支,，于40°C水中速融；25ml細(xì)胞方瓶中加入含10%COSMIC小牛血清的DMEM-F12培養(yǎng)基10ml,，將凍存管中細(xì)胞全部洗入瓶中,，置37°C 2.5%二氧化碳孵箱中靜置培養(yǎng)。4小時后倒去全部培養(yǎng)基以去除凍存液,，更換10ml培養(yǎng)基,，同上靜置培養(yǎng)。