日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

培養(yǎng)操作及注意事項(xiàng)說(shuō)明

 

 

一．產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

1,、細(xì)胞名稱：MKN45,；人胃癌細(xì)胞

 

2、生長(zhǎng)特性：    □ 貼壁   □ 懸浮   □懸浮+貼壁

 

3,、細(xì)胞生長(zhǎng)條件：

培養(yǎng)條件	90%RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
溫度	37℃
空氣條件	5% CO2,100% AIR
傳代方法	1:2傳代，2~3天換液
凍存條件	90%FBS+10%DMSO

4.背景資料：該細(xì)胞系由S Akiyama建立,，源于一位35歲患有印戒細(xì)胞癌的女性的胃淋巴結(jié),。

二．使用方法

1、您收到細(xì)胞后,，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm²培養(yǎng)瓶,，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜,，放入37℃,，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

 

2,、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3）棄上清,，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,，后放入37℃,，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞*貼壁后,，觀察培養(yǎng)結(jié)果,，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3,、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min,；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞,，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃過(guò)夜,，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃,。 

4,、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍,，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min,；

3）棄上清,，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm²培養(yǎng)瓶,，于37℃,，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。

附:

T25瓶細(xì)胞處理方法

收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,。如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系,。并進(jìn)行以下操作：

1.75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部,。

2.將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中預(yù)溫3-4小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。

3.預(yù)熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清,，1%雙抗）。

4.顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200×各一張）,。

5.①若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作,，去掉培養(yǎng)基,。每瓶添加第四步中準(zhǔn)備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng),。待細(xì)胞密度達(dá)到80%以上,，進(jìn)行傳代。

②若細(xì)胞密度較大,，達(dá)到80%以上,，將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。

注：

培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%,，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基,。由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái),，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，這時(shí)請(qǐng)?jiān)谂恼蘸髮腋〉募?xì)胞即時(shí)離心,，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天,；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,。（這里是針對(duì)原來(lái)*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來(lái)FBS濃度是20%,，可以增加到25%FBS濃度）   收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問(wèn)題,，煩請(qǐng)當(dāng)天盡快聯(lián)系并提供圖片，以便售后處理,。7天內(nèi)反饋,，細(xì)胞本身問(wèn)題免費(fèi)重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實(shí)際情況酌情處理；7天內(nèi)未接到任何反饋視為合格,，不予免費(fèi)售后