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牛腺病毒3型熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒
閱讀：608 發(fā)布時(shí)間：2019-4-2天凈沙系列
CAT#:14-23730
低溫運(yùn)輸，-20℃保存
牛腺病毒3型熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒
Bovine Adenovirus Type 3 qPCR Kit
使用手冊(cè)V1.0
產(chǎn)品及特點(diǎn) 牛血清的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中有一項(xiàng)重要的指標(biāo)是病毒的檢測(cè),。比較常見的易感
染奶牛和肉牛的病毒如DNA 病毒：牛腺病毒3 型（Bobine Adenovirus Type 3,，
BAV-3），主要引起牛的呼吸道和腸道疾病,，其主要特征為肺炎,、腸炎、結(jié)膜炎
和多發(fā)性關(guān)節(jié)炎,，是犢牛死亡的重要原因之一,。其易感和潛伏性給畜牧業(yè)及其國(guó)
際貿(mào)易帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)，給細(xì)胞培養(yǎng)以及相關(guān)基礎(chǔ)研究帶來(lái)一定的問(wèn)
題,。因此,，病毒的快速檢測(cè)是控制牛血清質(zhì)量的前提，除了傳統(tǒng)的培養(yǎng)傳代觀察
細(xì)胞病變,，血清學(xué)診斷技術(shù)外,，我們?cè)谶@里引入熒光定量PCR 的方法，來(lái)快速
檢測(cè)血清樣品中是否污染有BAV-3,。本產(chǎn)品是根據(jù)BAV-3 核酸序列的保守區(qū)pol
蛋白酶設(shè)計(jì)引物,，定制的一種檢測(cè)BAV-3 的熒光定量PCR 試劑盒。它具有下列
特點(diǎn)：
1. 即開即用,，用戶只需要提供DNA 模板即可使用,。
2. 快捷，整個(gè)PCR 過(guò)程只要一小時(shí),。
3. 靈敏度達(dá)達(dá)100copies/reactlon 水平,。
4. 熒光PCR mix 中含第二代飽和型熒光染料,，效果好于SYBR Green I,。
5. 密封體系，極大降低了假陽(yáng)性,。
6. 本產(chǎn)品跟各種熒光PCR 儀器兼容,。
規(guī)格及成分 成 份 編號(hào) 50 次塑料袋包裝
2×熒光PCR Mix 90408 1.5 mL
BAV-3 專一性引物一 yw1277 100 uL
BAV-3 專一性引物二 yw1278 100 uL
BAV-3 標(biāo)準(zhǔn)品
（1.27×10E11 拷貝/uL）
yw12791280 40 uL
DNA 稀釋液 121206-10 10mL
超純水 100935 1 mL
使用手冊(cè) 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存,，保存期限為12 個(gè)月,。
自備試劑 樣品DNA
使用方法 一、樣品DNA 的制備（本試劑盒不含所需試劑）
用自備試劑抽提病毒樣品DNA,。注意：可以選用本公司的病毒DNAout 或柱
式病毒DNAout,。
二、熒光PCR 反應(yīng)（25 uL 體系）
1. 配制標(biāo)準(zhǔn)品,，用DNA 稀釋液將BAV-3 標(biāo)準(zhǔn)品（1.27X10E11 拷貝/uL）稀
釋到不同的濃度,，每個(gè)濃度差10 倍，共8-10 個(gè)梯度,。此標(biāo)準(zhǔn)品系列將用于
制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
2. 設(shè)置PCR 反應(yīng)：在PCR 管中加入下列成分（N 取決于上步的稀釋梯度由客
戶自己決定）：
成分 樣品管
標(biāo)準(zhǔn)坪梯度
（共8-10 管）
陰性對(duì)照
2×熒光PCR Mix 12.5 uL 12.5 uL 每管 12.5 uL
待檢測(cè)樣品DNA（自備） 1-5 uL 無(wú) 無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品(8-10 個(gè)梯度) 無(wú) N uL 每管 無(wú)
BAV-3 專一性引物一 2 uL 2 uL 2 uL
BAV-3 專一性引物二 2 uL 2 uL 2 uL
補(bǔ)超純水到 25 uL 25 uL 25 uL
3. 上機(jī)進(jìn)行熒光定量PCR。熒光定量PCR 反應(yīng)參數(shù)如下（以ABI7500 熒光定
量PCR 儀為參考）：
過(guò)程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 94℃ 2 min
兩步式PCR 反應(yīng)
（40 個(gè)循環(huán)）
94℃ 30 s
60℃ 90 s
4. 根據(jù)8-10 管標(biāo)準(zhǔn)品的Ct 值（x 軸）和濃度（y 軸）描出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，再根據(jù)
待測(cè)樣品的Ct 值技術(shù)按出樣品的濃度,。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）核酸檢測(cè)試劑盒（RT-PCR）（CAT#：11-2325）