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人胚胎干細(xì)胞H9無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法

使用說(shuō)明書

細(xì)胞名稱 H9 Feeder Free 人胚胎干細(xì)胞H9 無(wú)飼養(yǎng)層

貨號(hào) 0692

種屬 人

組織來(lái)源 人胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

形態(tài) 球形克隆

生長(zhǎng)方式 貼壁

安全性 所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)

培養(yǎng) *培養(yǎng)液： mTeSR1 人ES/iPS 細(xì)胞無(wú)飼養(yǎng)層*培養(yǎng)試劑盒（Stem cell, 貨號(hào)

85850）

傳代消化液：溫和分離細(xì)胞試劑（Stem cell, 貨號(hào)07174）

凍存液：無(wú)血清無(wú)動(dòng)物成分細(xì)胞凍存液（Stem cell, 貨號(hào)07930）

基質(zhì)膠：hES 基質(zhì)膠（BD,，貨號(hào)354277）

溫度：37℃

溫度：37℃  氣相：95%空氣,，5%二氧化碳

傳代 收到細(xì)胞后,，請(qǐng)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)瓶外表進(jìn)行消毒，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行 1-2 小時(shí)的緩

沖,，待細(xì)胞恢復(fù)基本生長(zhǎng)狀態(tài)后,，進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：人胚胎干細(xì)胞H9無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法

（一）細(xì)胞未長(zhǎng)至 85%時(shí),，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到生物操作臺(tái)內(nèi),，嚴(yán)格無(wú)

菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，若培養(yǎng)瓶上無(wú)特殊標(biāo)注,，吸去剩余培養(yǎng)液，只留 6-8ml培

養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),。

（二）細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá) 85-95%）,。即可進(jìn)行傳代，具體步驟如下：

1.棄去培養(yǎng)液,，用 PBS 洗滌 1-2 次,，

2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化,，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞回縮變圓、

透亮,、輕拍甁壁呈流沙樣脫落,，則迅速拿回操作臺(tái)，加入雙倍的含 10%血清的*培

養(yǎng)液,，終止消化并輕輕吹打細(xì)胞,，使其變成單細(xì)胞懸液，

3.將細(xì)胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min,，棄上清，輕彈管底,，將細(xì)胞彈散,，

4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代,、凍存,，

5.如果沒有特別說(shuō)明，建議收到細(xì)胞后的次傳代比例為 1:2,。

注：1.觀察細(xì)胞密度用（4X物鏡）低倍鏡觀察,，以便正確的判斷細(xì)胞密度；觀

察細(xì)胞形態(tài)請(qǐng)用（10X 或 20X）高倍鏡觀察,；

2.瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用,，請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng),；

3.有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落,，可離心重懸后接種到新瓶?jī)?nèi),；

4.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、漏液及細(xì)胞污染,，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

保存 凍存條件：70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%胎牛血清+10%DMSO 

保存條件：液氮存儲(chǔ)

供應(yīng)限制 僅供研究之用

常見問(wèn)題 1.培養(yǎng)瓶有破裂,，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染,，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師

解決方案 解決。

人胚胎干細(xì)胞H9無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法

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