技術(shù)文章
細胞膜流動性測定實驗
閱讀:1716 發(fā)布時間:2019-2-15膜結(jié)構(gòu)中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)具有相對側(cè)向流動性;細胞膜是由磷脂雙分子層和鑲嵌、貫穿在其中及吸附在其表面的蛋白質(zhì)組成的,磷脂雙分子層疏水的尾部在內(nèi),,親水頭部在外。
實驗方法原理 常用于研究膜脂流動性的熒光探針為1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH),。DPH摻入到細胞膜脂烴鏈區(qū)后,介質(zhì)粘度增加,,順反異構(gòu)受到抑制,,成為能發(fā)光的全反構(gòu)型。
實驗材料 腫瘤細胞
試劑,、試劑盒 磷酸鹽緩沖液DPH
儀器,、耗材 熒光分光光度計離心機
實驗步驟
1. 取對數(shù)生長期的腫瘤細胞,以pH7.2,,0.01 mol/l 磷酸鹽緩沖液洗滌兩次,。
2. 取107個細胞,離心,,加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml,。
3. 25℃振蕩溫育30 min,再以PBS洗滌1次,。
4. 懸浮于4 ml PBS溶液中,。
5. 測定儀器為熒光分光光度計,在激發(fā)波長362 nm,,發(fā)射波長432 nm,,狹縫10條件下測定熒光強度。
注意事項
由于DPH可進入細胞內(nèi)部,,后來又合成了其陽性離子衍生物1-(4-三苯基)-6-苯基-1,3,5-己三烯(TMDPH),。TMDPH不能透過細胞膜進入細胞,因此,,理論上TMDPH標記法較DPH標記法更能準確的反映膜脂流動性,。