日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

本實驗介紹胰島素受體對胰島素親和性的測定方法,。本實驗來源于蛋白質(zhì)純化與鑒定實驗指南

實驗步驟    
材料

[125I]胰島素（受體級）（DuPontNENNEX196)

豬胰島素（如,，Sigma Chemical Co,I3505)

牛血淸白蛋白（BSA;1%)

試劑

結(jié)合緩沖液（冷配體置換實驗用)

(配方,，見“試劑的配制”,，PP.234~240)

操作程序

1)于微量離心管中建立下列反應(yīng)體系：

 

2)各離心管置搖床上，室溫下孵育2h,。

3)各管用微型離心機離心20min,去上清,。

4)用γ-計數(shù)器計數(shù)離心管內(nèi)的放射性強度。分別從第1至6管的cpm值中減去第7管的cpm值（非特異性cpm值和本底cpm值),，得特異結(jié)合的cpm值,。

5)將各管的特異性結(jié)合cpm值除以總cpm值，得與膜結(jié)合的那部分胰島素所占的份額,。該值乘以各管中的胰島素濃度,，即得配體-受體復(fù)合物的濃度（[HR],，亦稱[B],它表示結(jié)合的配體)。

6)從管中的胰島素濃度減去[HR],得游離配體的濃度（[H],亦稱[F],它表示游離的配體),。

7)至此,，可用幾種方法分析所得的結(jié)果。如能用計算機程序,，將數(shù)據(jù)直接代入下式則更好：

 

也可通過[HR]對log([H])作圖來分析這些數(shù)據(jù),。此圖應(yīng)給出S型曲線。于是,，可分別從[HR]的大值和曲線的拐點得出受體總數(shù)和KD值（Klotz,1982),。第三種方法是用斯卡査德（Scatchard)圖分析數(shù)據(jù)，斯卡査德圖就是所作的圖,。若只有一種類型的結(jié)合位點,則斯卡査德圖為一直線,。為作斯卡査德圖，先要確定對應(yīng)于每個[H]的[HR]/[H]值,，然后以[HR]/[H]值對[HR]作圖,此線的斜率為-1/KD,，橫坐標(biāo)的截距力受體總數(shù)([R]t)。若有多于一種類型的結(jié)合位點,且有不同的親和性時,，斯卡査德圖將是一條曲線而不是直線,。