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培養(yǎng)操作及注意事項說明

 

 

一．產品簡介

SCL-1人皮膚磷癌細胞培養(yǎng)方法

1,、細胞名稱：SCL-1,；人皮膚磷癌細胞

 

2,、生長特性：    □ 貼壁   □ 懸浮   □半懸浮半貼壁

 

3、細胞生長條件：

培養(yǎng)條件	90%RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
溫度	37℃
空氣條件	5% CO2,100% AIR
傳代方法	1:2傳代,，2~3天換液
凍存條件	90%FBS+10%DMSO

二．使用方法SCL-1人皮膚磷癌細胞培養(yǎng)方法

1,、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm²培養(yǎng)瓶,，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜,，放入37℃,，5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代,。

 

2,、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸,，然后按1:2比例進行分瓶傳代,，后放入37℃，5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4）待細胞*貼壁后,，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。

3,、細胞凍存：SCL-1人皮膚磷癌細胞培養(yǎng)方法

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃過夜,，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃,。 

4,、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍,，直至凍存管中無結晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中,， 1000rpm離心5min,；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸,，接種25cm²培養(yǎng)瓶,，于37℃，5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。SCL-1人皮膚磷癌細胞培養(yǎng)方法