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培養(yǎng)操作及注意事項說明

 

 

一．產(chǎn)品簡介

 

1,、細胞名稱：EA.hy926人臍靜脈融合細胞

EA.hy926人臍靜脈融合細胞描述 :在PEG脅迫下,，將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合，構(gòu)建了人臍靜脈細胞株, EA.hy926,。 融合子在HAT培養(yǎng)基上生長并以八因子相關(guān)抗原篩選,。 EA.hy926已經(jīng)過100次以上的群體倍增(PDLs)。 電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細胞質(zhì)分布以及組織特異性的細胞器,，分化的內(nèi)皮細胞特性如血管生成,，體內(nèi)平衡/血栓形成，血壓及炎癥反應(yīng),。 

1. 生長特性：成纖維細胞 
2. 組織來源：組織： 體細胞融合子
3. 細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞    

3,、細胞生長條件：

培養(yǎng)條件	90%RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
溫度	37℃
空氣條件	5% CO2,100% AIR
傳代方法	1:2傳代，2~3天換液
凍存條件	90%FBS+10%DMSO

二．使用方法

1,、您收到細胞后,，請按照以下方法進行操作：

取出25cm²培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜,，放入37℃,，5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代,。

 

2,、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸,，然后按1:2比例進行分瓶傳代,，后放入37℃，5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4）待細胞*貼壁后,，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。

3,、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次,；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min,；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中,；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存,。使用程序降溫盒可直接放入-80℃,。 

4、細胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）,，快速將其置入37℃水浴中解凍,，直至凍存管中無結(jié)晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中,， 1000rpm離心5min,；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸,，接種25cm²培養(yǎng)瓶,，于37℃，5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。