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外周血細胞瑞氏(Wright)染色及計數(shù)實驗
閱讀:720 發(fā)布時間:2018-12-18實驗方法原理
瑞氏染料中有美藍和伊紅兩種成分,,前者為堿性,,后者為酸性,它們與細胞內(nèi)的各種物質(zhì)具有不同的親和力,,使其顯現(xiàn)出不同的色調(diào),。血細胞核由去氧核糖核酸和強堿性的組蛋白、精蛋白等形成核蛋白,。這種強堿性的物質(zhì)與瑞氏染料中的酸性染料伊紅有親和力,,所以染成紅色;核蛋白中還有少量的 弱酸性蛋白,,它們又與染液中的堿性染料美藍起作用而染成藍色,,但含量太少,藍色反應(yīng)極弱 ,,故核染色呈現(xiàn)紫紅色,。較幼稚的細胞之胞漿和細胞核之核仁中含有酸性物質(zhì),,它們與染料中的堿性染料美藍有親和力,故染成藍色,。
實驗材料 血液
試劑,、試劑盒 瑞氏染料純甲醇磷酸二氫鉀磷酸氫二鈉
儀器、耗材 顯微鏡玻片蓋玻片滴管
實驗步驟
1. 制作血涂片
(1)滴一小滴血(約5 ul)于干凈玻片上,,推片與玻片應(yīng)呈約30°角,,用力均勻而較快,且不可復推,。
(2)如血滴較小,,推得較慢,角度小于30°,,所制涂片較薄,。
(3)如血滴較大,推得較快,,角度比30°大時,,則所制涂片較厚。
2. 將標本放平(置于一個固定架上),,用滴管將染液滴于涂片上,,可用滴管將染液驅(qū)散,使其布滿整個涂片,。
3. 染液布滿整個涂片后,,稍等片刻或立即加入緩沖液,,并使緩沖液與染液混均勻,。
4. 染液與緩沖液的比例
(1)染液量要充足,否則染液很快蒸發(fā),,將染料沉淀于細胞上,。
(2)染液與緩沖液的比例為1:2~4左右比較合適。
(3)稀釋度越大,,染色時間越長,,細胞著色較好,反之則越差,。
5. 染色時間:視具體情況而定,,一般約需10~30分鐘。
6. 沖洗:用自來水沖洗涂片上之染料,。
7. 顯微鏡檢查:待自然干燥后用光學顯微鏡檢查,。
收起
注意事項
1. 制作血涂片應(yīng)避免氣泡,厚度適中,。
2. 染液與緩沖液的比例要適中,。
其他
一,、正常血細胞形態(tài)
1. 成熟紅細胞:正常紅細胞為兩面微 凹而呈盤狀,染色后則呈中心淺染之桔紅色細胞,,平均直徑7.6 um,。
2. 成熟中性粒細胞:PB中有兩種,桿狀核和分葉核,。桿狀核粒細胞形態(tài):圓形或橢圓形,,直徑10~13 um。胞核如桿狀,、帶狀,,胞核之凹超過假設(shè)核圓徑的3/4,而且兩端的內(nèi)外有相當一段的平行,。染色質(zhì)凝固成塊狀,,著色不均勻,其間可有空白區(qū),。胞漿內(nèi)已不含有嗜堿性物質(zhì),,而滿布中性顆粒。中性分葉核粒細胞:圓形,,直徑10~13 um,。核呈分葉狀,少者分兩葉,,多者六,、七葉以上,葉與葉之間有細絲相連或*斷開,, 或互相重疊,。染色質(zhì)成細塊狀。胞漿內(nèi)布滿中性顆粒,。
3. 成熟淋巴細胞:圓形,,直徑5~18 um。核圓形或擬蠶豆狀,,染色質(zhì)致密成團塊狀,。胞漿量少,藍色,,可有少許圓形,、周邊整齊的嗜天青顆粒。大淋巴細胞胞漿量多,,呈淡藍色
4. 單核細胞:圓形或不規(guī)則形,,直徑12~20 um。胞核居中或偏一側(cè),其形不規(guī)則,。染色質(zhì)凝集如篩底狀或粗線條網(wǎng)狀,,但無凝集的塊狀染色質(zhì)。胞漿量多,,灰藍色,,散布許多細小的粉紅色顆粒,顆粒多者甚至使胞漿成為粉紅色,,可有空泡和外漿出現(xiàn),。
5. 血小板:正常血小板為星形、逗點狀或不規(guī)則狀,,直徑2~5 um,,呈淡藍色,中央推聚 干淡紫紅色的小顆粒,。