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小鼠肝細胞培養(yǎng)實驗
實驗方法原理    
直接從生物體內獲取組織細胞進行的培養(yǎng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代培養(yǎng)是建立各種細胞系的步,，是從事培養(yǎng)工作的人員應熟悉和掌握的基本的技術,。根據(jù)培養(yǎng)方法不同分為組織塊培養(yǎng)法和單層細胞培養(yǎng)法。
實驗材料    小鼠
試劑、試劑盒    DMEMDMEM胰酶PBS
儀器、耗材    飯盒紗布小剪子小鑷子大鑷子大燒杯平皿研磨玻片濾網離心管6 孔培養(yǎng)板吸管移液管手套微量加樣器
實驗步驟    
一,、實驗步驟

1. 將小鼠斷頸致死，置 75%酒精泡2-3 秒鐘,，取肝臟,，置于盛有 PBS 的平皿中。
 
2. 剔除脂肪,、結締組織,、血液等雜物，轉移到另一個盛有 PBS 液的平皿中,。
 
3. 用手術剪將臟器剪成小塊(大小約 1mm2),，玻片研磨,，轉到離心管，離心(1000 rpm，5 min),。
 
4. 視組織或細胞量加額加入5-6 倍(3-5  ml)胰酶,，37℃中消化 20 分鐘，每隔 5 分鐘振蕩一次,，或用吸 管吹打一次,，使細胞分離。
 
5. 加入3-5 ml 含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用,。
 
6. 用100 目孔徑濾網濾過,，除去未消化的大組織塊。
 
7. 再次離心5 min，棄上清液,。
 
8. 加入無血清培養(yǎng)液5 ml，沖散細胞,，再離心一次,，棄上清液。
 
9. 加入含血清的培養(yǎng)液 l-2 ml (視細胞量),，血球計數(shù)板計數(shù),。
 
10. 將細胞調整到5×105/ml 左右，轉移至6 孔培養(yǎng)板中,，37℃下培養(yǎng),。
 
收起 
注意事項    
1. 自取材開始，保持所有組織細胞處于無菌條件,。細胞計數(shù)可在有菌環(huán)境中進行,。

2. 在超凈臺中，組織細胞,、培養(yǎng)液等不能暴露過久,，以免溶液蒸發(fā)。

3. 凡在超凈臺外操作的步驟,，各器皿需用蓋子或橡皮塞蓋住,，以防止細菌落入。

4. 操作前要洗手,，進入超凈工作臺后要用75％酒精或0.2％新潔爾滅擦拭手,。試劑瓶口也要擦拭。

5. 點燃酒精燈,，操作在火焰附近進行,，耐熱物品要經常在火焰上燒灼。金屬器械燒灼時間不能太長,，以免退火,，且冷卻后才能夾取組織。吸取過營養(yǎng)液的用具不能再燒灼,，以免燒焦形成碳膜,。

6. 操作動作要準確敏捷，但又不能太快,，以防空氣流動,，增加污染機會。

7. 不能用手觸及消毒器皿的工作部分,，工作臺面上的用品擺放要布局合理,。

8. 瓶子開口后要盡量保持45°斜位。

9. 吸溶液的吸管等不能混用,。