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你試一試這兩種方法:
種：
1）將細(xì)胞系放在冰上
2）去除上清,，用pH7,。4的冷磷酸鹽緩沖液洗滌單層細(xì)胞兩次
3）加入1ml2%TritonX溶液冰浴15min
4)刮下單層細(xì)胞,，4度下10 000g 5min離心
5）溶液37度水浴 10min以分離水相和去污劑相，然后37度下2 000g離心5min
6)收集水相留作分析
7）用500ul冰冷的buffer C溶解去污劑相沉淀,，冰浴2min后加溫,，在按步驟6再次離心
8）按步驟8再次抽提去污劑相,，用buffer C將洗滌后的去污劑相稀釋到初始體積
9）用等量的buffer A分別稀釋水相與去污相，并進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)
試劑：
1）2%tritonX114:2%TritonX114,、50mmol/L Tris HCl（pH7,。5）、蛋白酶抑制劑
2）緩沖液A（含0,。5mol/LNaCl的RIPA buffer)
3)buffer C
10mmol/L Tris HCl(pH7.5)
150mmol/L NaCl
5mmol/L EDTA(PH7.5)

第二種方法：
液氮研磨組織,，組織100倍量預(yù)冷的緩沖液A（10mmol/L Tris-HCL,320nmol/L 蔗糖，PH7.4,，臨用前加1mM的PMSF）,；離心，每次10S×2,，間隔20S,，強(qiáng)度50，700g（4900rps）,，4度,，10分鐘。取上清,，將此上清,，37000g（18100rps），4度,，40分鐘,，棄上清，取沉淀,。用緩沖液B（A去掉蔗糖PH7.,，臨用前加1mM的PMSF）重新混懸。