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人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）培養(yǎng)

1 ). 將15-20cm長的新生兒臍帶放入無菌的PBS溶液中儲存,。

（注：4℃下多貯存24小時,，室溫下不超過6小時,，否則廢棄）

2 ). 用一個鈍頭的針頭扎入臍帶靜脈管中，用無菌的PBS溶液沖洗3-5次,，將污血沖洗干凈為止,。

3 ). 用手術(shù)鉗夾緊臍帶下端,，加入15ml 的膠原酶（1mg/ml）室溫下消化15-20分鐘,，并不時上下?lián)u動臍帶,。

4 ). 消化完后,，將下端手術(shù)鉗松開,，消化液流入一個50 ml無菌離心管中,，用無菌的PBS溶液沖洗臍帶2-3次,。

5 ).將收集液離心（2000轉(zhuǎn)/分）3分鐘,。

6 ).倒去上清,，加入10ml M199培養(yǎng)基（加入10U/ml的bFGF），用彎管吹散細胞,，將所有液體轉(zhuǎn)入一個用明膠包被好的培養(yǎng)瓶中，37℃培養(yǎng),。

（注：每個培養(yǎng)瓶中加入3-4ml無菌的1%的明膠溶液,，搖勻使得明膠溶液*鋪滿瓶底，放入37℃孵育,，少2小時,，用前將明膠溶液倒了即可,，明膠包被有利于細胞貼壁,。）

7 ). 培養(yǎng)24小時后,，倒掉培養(yǎng)基,，并用無菌的PBS溶液清洗2-3次，洗掉紅細胞和死細胞,，加入10 ml新鮮的 M199培養(yǎng)基,。

8 ). 以后每2天換一次培養(yǎng)基（每次換掉2/3的培養(yǎng)基）,。

9 ).一般培養(yǎng)5-7天,，細胞可長滿至80-90%單層，這時可以傳代,。

10 ).倒掉培養(yǎng)基,，用無菌的PBS溶液清洗2-3次，加入2-3ml消化液（0.25%胰酶+0.1%EDTA）消化細胞,，在顯微鏡下觀察，一旦細胞變圓,，即加入2-3倍的有血清的DMEM培養(yǎng)基終止反應(yīng),。

11 ).用彎管將細胞吹打下來，并將所消化的細胞轉(zhuǎn)移到一個50 ml無菌離心管中,，2000轉(zhuǎn)/分，離心3分鐘,。

12 ).倒掉上清,加入10ml新鮮培基,一般一瓶細胞可傳代3-4瓶.以后照此傳代培養(yǎng).

        一般傳代2-3代（培養(yǎng)了20天左右）用于做各種實驗效果很好,。