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大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)可以：（1）用于血液流動性、防止血栓形成,、調(diào)節(jié)血管張力等研究,；（2）用于選擇性通透性以及免疫調(diào)節(jié)等方面研究。

實驗方法原理    
貼塊法適用于內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)量低的,、管徑較小血管的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng),，其方法較酶消化法簡便、經(jīng)濟,。但缺點使易混有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞,，前者的貼壁時間和內(nèi)皮接近，后者貼壁較內(nèi)皮慢,，而且會被肝素所抑制,。
實驗材料    雄性Wistar大鼠
試劑、試劑盒    DMEM胎牛血清內(nèi)皮細(xì)胞生長因子肝素鈉青鏈霉素明膠胰蛋白酶PBSD-Hanks’液
儀器,、耗材    手術(shù)器械眼科剪眼科鑷培養(yǎng)皿手術(shù)刀培養(yǎng)瓶CO2培養(yǎng)箱
實驗步驟    
一,、實驗方法
1. 頸椎脫臼處死大鼠，將整個大鼠浸泡于75%乙醇中消毒約1  min,。在無菌狀態(tài)下,，逐層剪開胸腔,，分離取出主動脈，放含無菌 D-Hanks’液培養(yǎng)皿中,。

2. 用眼科剪,、鑷盡量去除血管外膜的脂肪和纖維組織。然后,，用含抗生素的D-Hanks’液沖洗血管的外表面及血管腔內(nèi)的凝血數(shù)次,，再放入另一無菌培養(yǎng)皿中。

3. 用眼科剪縱向剪開血管,，平展在培養(yǎng)皿中,。用非常銳利的手術(shù)刀將其切成1 mm3 大小的動脈植 塊(或者用剪刀剪，依照個人習(xí)慣),，然后種植到培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿(培養(yǎng)瓶或皿用1%明膠預(yù)置 37℃下過夜,， 使用前2  h 移入CO2培養(yǎng)箱中。用時可以先經(jīng)含 10%小牛血清的培養(yǎng)液沖洗),。將動脈植塊的內(nèi)膜面與瓶底接觸,，種植密度約為 1 塊/cm2 。

4. 置培養(yǎng)箱中靜置2 h(干貼壁),。然后,，加入0.5 ml 含 25%胎牛血清的培養(yǎng)液，液量以略蓋過動脈植塊內(nèi)膜面,，而又不使植塊漂浮為宜,。24 h 后，更換培養(yǎng)液,，加入 2-3 ml 培養(yǎng)液,。

5. 72 h 左右的時候，當(dāng)觀察到內(nèi)皮細(xì)胞充分長出,，而成纖維細(xì)胞剛要長出的時候,，將動脈植塊除去，刮除成纖維細(xì)胞,，換培養(yǎng)液1 次,。以后每2 天換液一次，每次換1/2~1/3 的液量,。繼續(xù)培養(yǎng) 8-10 d,， 細(xì)胞融合成單層，即可傳代,。

二,、實驗結(jié)果

植塊培養(yǎng)法進行的原代培養(yǎng)，一般在培養(yǎng)2-3 天,，動脈植塊周圍即有細(xì)胞生長,，并漸向外延伸,，呈扁平短梭形或多角形；約8-10 d 后細(xì)胞融合成片,。采用vWF 免疫組化鑒定,，主要表達(dá)在細(xì)胞漿中。

一,、實驗討論
 
植塊培養(yǎng)法適用于內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)量低的,、管徑較小血管的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)，其方法較酶消化法簡便,、經(jīng)濟,。但缺點使易混有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞，前者的貼壁時間和內(nèi)皮接近,，后者貼壁較內(nèi)皮慢，而且會被肝素所抑制,。
 
而由于成纖維細(xì)胞生長較快,，隨著傳代次數(shù)越多，其污染的程度越重,，從而使培養(yǎng)失敗,。因而，抑制和減少成纖維細(xì)胞是大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵問題,。本法采用的方法是：
   
1. 在合適的時間去除動脈塊,，即當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞已經(jīng)爬出，初具規(guī)模時(大概在72 h 左右的時候,，按照本文的培養(yǎng)液條件,，因為有生長因子，內(nèi)皮容易爬出和增殖),，去除動脈塊,，并刮除成纖維細(xì)胞。
 
2. 使用含肝素的培養(yǎng)液(在培養(yǎng)液中加入100 U/ml 的肝素),，可使內(nèi)皮細(xì)胞純度提高,；
   
3. 高濃度的血清和50 µg/ml ECGF 可以充分地促進內(nèi)皮細(xì)胞增殖，而使內(nèi)皮細(xì)胞成為優(yōu)勢細(xì)胞,。另外,，動脈植塊干貼壁的時間不宜超過2 h，而加培養(yǎng)液這一步驟尤為關(guān)鍵,，過少會使內(nèi)膜接觸不到培養(yǎng)液,，過多則易使動脈小塊漂浮，導(dǎo)致貼壁失敗,。因此,，干貼壁后加培養(yǎng)液,，加入少量高營養(yǎng)的培養(yǎng)液(0.5-1 ml)，可以避免這些問題,。
   
組織塊貼塊的時候,，不可避免會有一些塊貼的方向不是內(nèi)膜面，那么后將爬不出內(nèi)皮,，甚至長出較多雜質(zhì)細(xì)胞,，需刮除。
   
另外,，部分塊即使大小合適,，方向也正確，也可能爬不出來,，去除組織塊的時候,，應(yīng)該以大局為重，看到內(nèi)皮細(xì)胞已經(jīng)爬出較多,，而雜質(zhì)細(xì)胞也開始爬出的時候,，就要果斷地去除組織塊了。72 h 只是個大概的時間,，初學(xué)者不可以拘泥,。