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石蠟切片免疫組化實驗步驟1.  石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水,，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）,。

 

2.  取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,，加入微波盒中，微波加熱至沸騰,，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘,，取出微波盒流水自然泠卻,，從緩沖液中取出玻片,，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’,。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的,，視具體情況而定）

 

3.  每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘,，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性,。PBS沖洗3×3’。

 

4.  除去PBS液,，每張切片加1滴相應(yīng)的抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)）,，室溫下孵育2小時。

 

5.  PBS沖洗3×5’,。除去PBS液,，每張切片加1滴聚合物增強劑，室溫下孵育20分鐘,。PBS沖洗3×3’,。

 

6.  除去PBS液，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物,，室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’。

 

7.  除去PBS液,，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺）,，顯微鏡下觀察5分鐘。

 

8.  蘇木素復(fù)染,，0.1%HCl分化,，自來水沖洗，藍(lán)化,，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,，二甲苯透明，中性樹膠封固,，晾干后觀察,。

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石蠟切片免疫組化實驗步驟