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細(xì)胞培養(yǎng)之問(wèn)題解答
閱讀：448 發(fā)布時(shí)間：2018-7-121,、冷凍管應(yīng)如何解凍,？
取出冷凍管后,， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化,， 并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿,， 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),， 必須注意安全,， 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2,、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí),， 是否應(yīng)馬上去除DMSO？
除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外,， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）,， 在解凍之后， 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,， 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。
3,、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,？
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,， 細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)， 造成細(xì)胞無(wú)法存活,。
4,、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類(lèi)？
不能,。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,， 所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清,， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。
5,、何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思,， 兩者都是指胎牛血清,， FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼， 請(qǐng)不要再使用,。CS (calf serum) 則是指小牛血清,。HS (horseserum) 則是指馬血清。
6,、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 % 或10% CO2,？或根本沒(méi)有影響？
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng),， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2 濃度,。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10 % CO2,；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時(shí),， 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞。
7,、何時(shí)須更換培養(yǎng)基,？
視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定， 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間,，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可,。
8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素,？
除于特殊篩選系統(tǒng)中外,， 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下， 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素,。
9,、附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA 濃度？應(yīng)如何處理,？
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na,。次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中， 保存于–20 ℃,，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低,， 并可減少污染之機(jī)會(huì)。
10,、懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理,？
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中， 稀釋細(xì)胞濃度即可,， 若培養(yǎng)液太多時(shí),， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高， 直到無(wú)法容納為止。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度,， 重復(fù)前述步驟即可。