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1,、冷凍管應如何解凍？

取出冷凍管后,， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍,， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化， 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,， 否則易發(fā)生污染情形,。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時， 必須注意安全,， 預防冷凍管之爆裂,。

2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時,， 是否應馬上去除DMSO,？

除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）,， 在解凍之后,， 應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題,。

3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,？

不能,。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,， 細胞大都無法立即適應,， 造成細胞無法存活。

4,、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類,？

不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,， 所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響,。來自不同物種的血清， 在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活,。

5,、何謂FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 兩者都是指胎牛血清,， FCS 乃錯誤的使用字眼,， 請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清,。HS (horseserum) 則是指馬血清,。

6、培養(yǎng)細胞時應使用5 % 或10% CO2,？或根本沒有影響,？

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2 濃度,。當培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時,，細胞培養(yǎng)時應使用10 % CO2；當培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時,， 則應使用5 % CO2 培養(yǎng)細胞,。

7、何時須更換培養(yǎng)基,？

視細胞生長密度而定,， 或遵照細胞株基本數(shù)據上之更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可,。

8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素,？

除于特殊篩選系統(tǒng)中外,， 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下， 培養(yǎng)基中不應添加任何抗生素,。

9,、附著性細胞繼代時所使用之trypsin-EDTA 濃度？應如何處理,？

一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na,。次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中， 保存于–20 ℃,，避免反復冷凍解凍造成trypsin 之活性降低,， 并可減少污染之機會。

10,、懸浮性細胞應如何繼代處理,？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中， 稀釋細胞濃度即可,， 若培養(yǎng)液太多時,， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,， 直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度,， 重復前述步驟即可。