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小鼠成纖維細胞
閱讀：317 發(fā)布時間：2018-7-7培養(yǎng)操作及注意事項說明
一．產品簡介
1、細胞名稱：L929,；小鼠成纖維細胞
2,、生長特性： □ 貼壁 □ 懸浮 □半懸浮半貼壁
3、細胞生長條件：
培養(yǎng)條件 | 90%MEM+10%FBS+1%P/S |
溫度 | 37℃ |
空氣條件 | 5% CO2,95% AIR |
傳代方法 | 1:2傳代,，2~3天換液 |
凍存條件 | 90%FBS+10%DMSO |
二．使用方法
1,、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出25cm2培養(yǎng)瓶,，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,，拆下封口膜，放入37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。
2,、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次,；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化,，再輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min；
3）棄上清,，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸,，然后按1:2比例進行分瓶傳代，后放入37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結果,，之后進行換液培養(yǎng)或傳代,。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,，倒置顯微鏡下觀察,，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落,，然后將懸液轉移至15ml離心管中,，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞,，并放置于凍存管中,；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜,，24h后轉入液氮中進行長期保存,。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4,、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）,，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶,，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁,；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min,；
3）棄上清,，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶,，于37℃,，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）第二天,，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),。
附:
T25瓶細胞處理方法
收到細胞后,，檢查外包裝是否完整，細胞培養(yǎng)瓶是否完好,。如有破損漏液等問題，請即時,。并進行以下操作：
1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養(yǎng)瓶外部,。
2. 將細胞放入37度培養(yǎng)箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
3. 預熱培養(yǎng)基（含10%胎牛血清,，1%雙抗）。
4. 顯微鏡觀察細胞生長情況,，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）,。
5. ①若細胞密度較小，無菌操作,，去掉培養(yǎng)基,。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養(yǎng)基。放到37度培養(yǎng)箱培養(yǎng),。待細胞密度達到80%以上,，進行傳代。
②若細胞密度較大,，達到80%以上,，將細胞傳代培養(yǎng)。
注：
培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基血清濃度為5%,，建議更換成自己配好的新鮮培養(yǎng)基,。由于運輸過程中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況,，這時請在拍照后將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天,；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基,。（這里是針對原來*培養(yǎng)基FBS濃度是10%的情況，如果原來FBS濃度是20%,，可以增加到25%FBS濃度） 收到細胞后如細胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問題,，煩請當天盡快并提供圖片，以便售后處理,。7天內反饋,，細胞本身問題免費重發(fā)如人為原因導致可根據實際情況酌情處理；7天內未接到任何反饋視為合格,，不予免費售后