日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

免疫熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)流程（IF）

免疫熒光單標(biāo)記方法

 

免疫熒光單標(biāo)記是指只標(biāo)記一種蛋白質(zhì)分子,，方法比較簡(jiǎn)單，只要按照染色步驟去做,，通常不存在太多的問(wèn)題,。但要注意固定液的選擇，固定液選擇的合適與否,，可能會(huì)直接影響染色結(jié)果,。具體染色方法如下。

免疫熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)流程（IF）

1,、所需材料與試劑

 

a, 培養(yǎng)在蓋玻片或玻璃培養(yǎng)皿中融合程度達(dá)到60%-70%的細(xì)胞,。

 

b, 一抗、FITC或TRITC標(biāo)記的二抗,。

 

c, 4%多聚甲醛固定液或冷丙酮固定液 (-20℃預(yù)冷20 min),。

 

d, 封閉液。

 

e, 0.01mol／LPBS緩沖液,。

 

2,、染色方法

 

a, 取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片或glass-bottom培養(yǎng)皿，用0.01MPBS洗2-3遍,。

 

b, 加入0.3%的Tritonx-100, 37℃, 30 rain

 

c, 加入4%多聚甲醛試問(wèn)固定30 min或冷丙酮4℃固定10 min,。

 

d，正常阻斷血清1:20封閉試問(wèn)20-30 min,，抑制IgG的非特異性結(jié)合,。阻斷血清必須選擇與二抗同一種屬的正常血清。

 

e, 去掉正常血清,，直接加入一抗,，37℃孵育1 h或4℃過(guò)夜?？贵w以0.01 mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗(yàn)而定),。

 

f, 0.3% TritonX-100洗5 min，0.01 mol/IPBS洗5 min,，0.3% TritonX 5 min,，0.01 M PBS洗5 rain。

 

g, 加入FITC-二抗或TRITC-二抗,，37℃,，孵育1h,。

 

h, 0.3%TritonX-100洗5rain，0.01 mol/LPBS洗5min,，0.3% Triton X 5min，0.01mol/LPBS洗5 min,，用濾紙吸干,。

 

i, 90%甘油(PBS配制)封片。

 

j, 激光掃描共焦顯微鏡下觀察,，或于4℃避光保存,。

免疫熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)流程（IF）

免疫熒光雙標(biāo)記方法

 

免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明,。此方法稍微復(fù)雜一些,，首先應(yīng)注意所用的一抗必須是來(lái)自不同種屬動(dòng)物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來(lái)自家兔,；B抗體為單克隆抗體,，來(lái)自小鼠)。其次,，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊,，且盡量遠(yuǎn)離，通?？梢赃x擇FITC和TRITC,、Alex488和TRITC、FITC和Cy5,，或Cy3和Cy5等來(lái)組合,。通常情況下，染色時(shí)兩種一抗可以同時(shí)孵育,，然后可以同時(shí)孵育兩種二抗,。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強(qiáng)時(shí),，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗,。其他步驟同免疫熒光單標(biāo)記。

?