PCR實驗室分區(qū)設置及要求
要求及功能分區(qū) PCR實驗室分為bai四個區(qū)域,,進入各工作區(qū)域必du須嚴格按照單一方向進行,,zhi不dao同的工作區(qū)域使用 不同的工作服(例如不同的顏色),。
工作人員離開各工作區(qū)域時,,不得將工作服帶出,,
四區(qū)域分別 1.試劑配制區(qū)n2.樣品處理區(qū)n 3.核酸擴增區(qū)n 4.產物分析區(qū)n 如使用全自動分析儀,,區(qū)域可適當合并,三四區(qū)可合并為擴增產物分析,。
各區(qū)的功能是:
1.1.1 試劑準備區(qū):擴增試劑的配制、分裝和保存,。
1.1.2 樣品處理區(qū):樣品登記,、分裝;核酸提取,、保存和加樣,。
1.1.3 擴增產物分析區(qū):擴增產物的測定,、結果分析、登記及報告,。
1.2 擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開,,須使用不同的房間,兩區(qū)之間有一定的間隔,。
1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進行少量試劑配制,。
1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準備區(qū)可設在同一房間內: 1.4.1 在生物安全柜內操作。
1.4.2 每個實驗人員,、實驗組分別使用各自的試劑及耗材,。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4 用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實驗前后進行清潔及消毒,。
設計要求:
PCR實驗室可以是分散形式,,也可以是組合形式,現(xiàn)要主要是以組合形式為主流。完成一組PCR 實驗,,通常應經過試劑配制,、樣品處理、核酸擴增及產物分析四個實驗過程,,若實驗工藝需要,,還 應增加樣品粉碎過程。
一,、分散形式PCR實驗室 所謂分散形式PCR實驗室,,是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠,呈分散布置形式,。
對于這種布置形式的PCR實驗室,,由于各個實驗之間不易相互干擾,因此無需特殊條件要求,。
二,、組合形式
所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,組成獨立實驗區(qū)域 的形式,。對于組合形式PCR實驗室,,由于各個實驗間集中布置,容易造成相互干擾,,因此,,對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設緩沖間,,以減少室內外空氣交換,。試劑配制室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入,,造成污染,可以通 過控制進風風量大于排風風量達到正壓效果,。
核酸擴增室及產物分析室應呈微負壓,,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品,可以通 過控制排風風量大于進風風量達到負壓效果,。
在理想情況下,,PCR實驗室緩沖間內,可設置正壓,,使室內空氣不流向室外,,室外空氣不流向 室內。
PCR實驗室進風由原有空調控制,,要求將空調風口安裝到定點,,且高度為地面鋪 裝好后2600mm處。 如果使用熒光PCR儀,,擴增室和產物分析室可以合并。
若房間進深允許,,可設PCR內部專用走廊,。需要指出的是在減少室內外空氣交換方面,緩沖間 比專用走廊更有意義,。 各個區(qū)域之間應具備單向的實驗工藝流,、物流、人流與氣流,,形成單向流程的保護屏障,,避免 實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果,。 實驗室的墻體,,包括頂棚,應結構牢固,、氣密性好,;
所有陰角宜采用圓弧形線條過渡;墻體內 壁光潔,、不吸附,、耐腐蝕、易清洗消毒,;地面材料應滿足無縫隙,、無滲漏、光潔,、耐腐蝕的要求,。
主要設備 試劑準備區(qū) 儀器設備主要有冰箱、超凈臺,、加樣器,、混勻器,、天平和離心機等,加樣器,、天平除了要專用外,,還應有定期校準。 試劑分裝應在超凈臺中進行 擴增反應混合液應使用分子生物學級的,,試劑制備好后應有質檢:一是否有污染,、二是檢測試劑的擴增效果。 標本制備區(qū)儀器設備主要有生物安全柜,、加樣器,、離心機、溫育儀,、混勻器等 擴增區(qū) 擴增區(qū)的主要儀器是核酸擴增儀,、超凈臺、微量加樣器,、離心機,、可移動紫外燈。擴 增儀需進行校準,。并配備UPS電源,,以防止由于電壓的波動,停電對擴增效果的影響,。 分析區(qū) 本區(qū)所使用的儀器設備有酶標儀,、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實驗區(qū)的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規(guī)定的.
主體結構:主體為彩鋼板,、鋁合金型材,。室內所有陰角、陽角均采用鋁合金50內圓角鋁,,從而解決容易污 染,、積塵、不易清掃等問題,。
結構牢固,,線條簡明,美觀大方,,密封性好,。 標準的四區(qū)分隔和氣壓調節(jié):將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增,,產物分析四個獨立的實驗區(qū),。整個區(qū)域有一個 整體緩沖走廊。
每個獨立實驗區(qū)設置有緩沖區(qū),同時各區(qū)通過氣壓調節(jié),,使整個PCR實驗過程中試 劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產物對人員和環(huán)境的污染,。
可打開緩沖區(qū),緩沖區(qū)和 PCR 擴增區(qū)的排風扇往外排氣,,在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上 都安裝有風量可調的回風口,,空氣通過回風口向室內換氣。
消毒:在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈,,供消毒用,。
在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū) 還設置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒,。 不銹鋼傳遞窗:試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,,整體性好,。便于進行清掃,耐腐蝕,。 照明燈具要選用凈化燈具,,能達到便于清洗、不積塵的特點,。 在建設的過程中應注意: 規(guī)范的安裝流程和全面的服務流程,。