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冷凍干燥機的應用之微生物細菌的儲存方法
 

　　好氧菌冷凍干燥管的制備
 

　　1,、安瓿管準備
 

　　安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時,，先用2%鹽酸浸泡過夜,，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性,，干燥后,、貼上標簽，標上菌號及時間,，加入脫脂棉塞后,，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用,。
 

　　2,、保護劑的選擇和準備
 

　　保護劑種類要根據(jù)微生物類別選擇,。配制保護劑時,，應注意其濃度及pH值,，以及滅菌方法,。如血清,，可用過濾滅菌,；牛奶要先脫脂,，用離心方法去除上層油脂，一般在100℃間歇煮沸2-3次,，每次10-30分鐘,，備用。
 

　　3,、凍干樣品的準備
 

　　在適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,，進行純度檢查后(參見*自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術規(guī)程》(試行))，與保護劑混合均勻,，分裝,。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜(以大腸桿菌為例，為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升,，只需10毫升瓊脂斜面兩支),。采用較長的毛細滴管，直接滴入安瓿管底部,，注意不要濺污上部管壁,，每管分裝量約0.1-0.2毫升，若是球形安瓿管,，裝量為半個球部,。若是液體培養(yǎng)的微生物，應離心去除培養(yǎng)基,，然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻,，再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短,，在1-2小時內(nèi)分裝完畢并預凍,。分裝時應注意在無菌條件下操作。
 

　　4,、預凍
 

　　一般預凍2小時以上,，溫度達到-20℃到-35℃左右。
 

　　5,、冷凍干燥
 

　　采用冷凍干燥機進行冷凍干燥,。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內(nèi)，開始冷凍干燥,，時間一般為8-20小時,。
 

　　6、真空封口及真空檢驗
 

　　將安瓿管頸部用強火焰拉細,，然后采用真空泵抽真空,，在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度,。
 

　　7,、保藏
 

　　安瓿管應低溫避光保藏,。
 

　　8、質(zhì)量檢查
 

　　冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查,，如存活率,、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異,、雜菌污染等,。
 

　　厭氧菌冷凍干燥管的制備
 

　　主要程序與需氧菌操作相同，注意保護劑的選擇和準備,，保護劑使用前應在100℃的沸水中煮沸15分鐘左右,，脫氣后放入冷水中急冷，除掉保護劑中的溶解氧,。
 

　　復蘇方法
 

　　先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部,，將安瓿管頂部燒熱，用無菌棉簽沾冷水,，在頂部擦一圈,，頂部出現(xiàn)裂紋，用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,，敲下已開裂的安瓿管的頂端,，用無菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊，使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上,，進行適溫培養(yǎng),。