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睡眠呼吸暫停細(xì)胞培養(yǎng)模型中,間歇性缺氧頻率幅度對(duì)內(nèi)皮傷口愈合的調(diào)節(jié)作用

閱讀:1674      發(fā)布時(shí)間:2021-11-17
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阻塞性睡眠呼吸暫停(OSA)是一種非常普遍的呼吸系統(tǒng)疾病,,具有潛在的不良神經(jīng)認(rèn)知,、代謝、腫瘤和心血管后果,。間歇性缺氧(Intermittent hypoxia-IH)是由阻塞性睡眠呼吸暫?;颊呱虾粑婪磸?fù)塌陷和重新開放引起的,是這種夜間呼吸系統(tǒng)疾病的主要原因之一,,并與阻塞性睡眠呼吸暫停的許多發(fā)病率有關(guān),。

然而,IH也被認(rèn)為是一種通過誘導(dǎo),、促進(jìn)細(xì)胞和器官的預(yù)處理的潛在保護(hù)因子,。事實(shí)上,關(guān)于IH在心血管上的具體作用仍存在持續(xù)的爭(zhēng)議,。而IH誘導(dǎo)活性氧和炎癥介質(zhì)的釋放,,易導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化,從而損害血管內(nèi)皮功能,,IH也可能發(fā)揮心臟保護(hù)作用,,并通過激活聚焦于誘導(dǎo)預(yù)處理的適應(yīng)性反應(yīng)發(fā)揮治療作用。





 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

細(xì)胞培養(yǎng)是研究IH潛在影響的一種有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)方法,,鑒于研究控制良好的IH模擬OSA對(duì)細(xì)胞的影響和合適的實(shí)驗(yàn)設(shè)置的可用性,。有研究驗(yàn)證了這樣一 個(gè)假設(shè):在睡眠呼吸暫停細(xì)胞培養(yǎng)模型中,間歇性缺氧的頻率和幅度對(duì)內(nèi)皮傷口愈合有調(diào)節(jié)作用,。

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實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>









為了研究間歇性缺氧的頻率和幅度對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮傷口愈合的影響,。
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實(shí)驗(yàn)方法









對(duì)單層人類原代內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行損傷,然后進(jìn)行供氧以進(jìn)行細(xì)胞氧合(分別以氧分壓1%,、4%,、13%、20%的實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行),,和以不同頻率的間歇低氧實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(0.6,、6,、60個(gè)循環(huán)周期/小時(shí)),幅度范圍(濃度13-4%或20-1%),,使用新型實(shí)驗(yàn)儀器,,24小時(shí)后測(cè)量創(chuàng)面愈合情況。

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細(xì)胞培養(yǎng)示意圖:PDMS透氣薄膜,、進(jìn)氣口,、出氣口、培養(yǎng)皿,、培養(yǎng)基
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實(shí)驗(yàn)過程









 

 


得益于技術(shù)的開發(fā),,實(shí)驗(yàn)的技術(shù)瓶頸已看見了曙光,,方法是在一層透氣薄膜上培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞,,然后在透氣薄膜下方提供高速供氧,從而讓氧氣擴(kuò)散到細(xì)胞,,完成氧合作用,。

實(shí)驗(yàn)組(氧分壓13%-4%):常用于用于典型研究的實(shí)驗(yàn)組

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實(shí)驗(yàn)組(氧分壓13%-4%)
實(shí)驗(yàn)組(氧分壓20%-1%):此實(shí)驗(yàn)組更貼近真實(shí)的阻塞型睡眠呼吸暫停病人的情況,更能模擬和反映阻塞性睡眠呼吸暫停(OSA)病人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的氧張力值,。

微信圖片_20211117172532.jpg

實(shí)驗(yàn)組(氧分壓20%-1%)
確實(shí),,在無呼吸暫停的正常通氣和氣體交換條件下,動(dòng)脈血氧分壓(PaO2)為~100mmhg(即13% O2),。
 假設(shè)在嚴(yán)重OSA事件中,,動(dòng)脈血氧飽和度(SaO2)可達(dá)到~60%的低點(diǎn),相應(yīng)的PaO2為~30 mmHg,,相當(dāng)于只有4% O2,。

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持續(xù)氧分壓為13%和4%,分別24小時(shí)后的傷口愈合情況
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果









 


  • 在氧氣濃度為20%和13%時(shí),,細(xì)胞單層修復(fù)效果相似,,但在氧氣濃度為4%的持續(xù)缺氧條件下,細(xì)胞單層修復(fù)顯著增強(qiáng)(約為原來的兩倍),。

  • 間歇低氧的幅度和頻率顯著影響創(chuàng)面的愈合:

  • 循環(huán)周期范圍為氧氣濃度13% - 4% ,,以低循環(huán)頻率(0.6 循環(huán)周期/小時(shí))的實(shí)驗(yàn)組,內(nèi)皮創(chuàng)面愈合加速了102%,。

  • 然而與13%-4%實(shí)驗(yàn)組對(duì)比的話,,20%-1%實(shí)驗(yàn)組的傷口愈合速度分別降低了 74% (6循環(huán)周期/小時(shí))和 44%(0.6循環(huán)周期/小時(shí))

  • 高頻間歇低氧實(shí)際上模擬了嚴(yán)重阻塞性睡眠呼吸暫停(OSA) (60循環(huán)周期/小時(shí)),無論氧合周期幅度如何變化,,均不能顯著改變內(nèi)皮創(chuàng)面的愈合,。

氧分壓為4%的實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面愈合情況顯著比對(duì)照組(氧分壓13%)高很多

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間歇低氧實(shí)驗(yàn)組方面,低頻間歇低氧實(shí)驗(yàn)組(0.6循環(huán)周期/小時(shí))創(chuàng)面愈合顯著加快,,模擬嚴(yán)重阻塞性睡眠呼吸暫停OSA的間歇低氧實(shí)驗(yàn)組(60循環(huán)周期/小時(shí))則沒有顯著的創(chuàng)面愈合反應(yīng),。
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總結(jié)









間歇性缺氧的頻率和幅度顯著改變傷口愈合的反應(yīng),,尤其可以對(duì)主動(dòng)脈內(nèi)皮傷口愈合起關(guān)鍵作用,并成為決定細(xì)胞在阻塞性睡眠呼吸暫停(OSA)中如何反應(yīng)的關(guān)鍵因素,。

 


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塔望MC102活細(xì)胞環(huán)境控制器,,可以提供穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境,實(shí)現(xiàn)邊培養(yǎng)邊觀察,,省去了使用傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)箱的步驟,,避免了搬運(yùn)細(xì)胞壁過程中污染了細(xì)胞的風(fēng)險(xiǎn)。

· 可控制參數(shù):溫度,、濕度(增濕),、氧氣濃度、二氧化碳濃度

· 氧氣濃度控制范圍:0.1%-25%,,調(diào)節(jié)精度為0.2%,,可選擇0-100%量程

· 溫度控制范圍:30?40℃,精度為0.1℃,;可選配低溫功能

· 二氧化碳濃度控制范圍:0.1%-20%,,調(diào)節(jié)精度為0.1%





 


 

參考文獻(xiàn)

1. Allen CB, Schneider BK, White CW. Limitations to oxygen diffusion and equilibration in in vitro cell exposure systems in hyperoxia and hypoxia. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 281: L1021–L1027, 2001.

2. Almendros I, Montserrat JM, Torres M, Bonsignore MR, Chimenti L,Navajas D, Farré R. Obesity and intermittent hypoxia increase tumor growth in a mouse model of sleep apnea. Sleep Med 13: 1254 –1260, 2012. doi:10.1016/j.sleep.2012.08.012.

 

 

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