日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

pH值是細(xì)胞系高效生長(zhǎng)的關(guān)鍵。

例如,，大多數(shù)細(xì)胞系在pH 7.2-7.4時(shí)繁殖最好，成纖維細(xì)胞在pH 7.7時(shí)繁殖旺盛,，轉(zhuǎn)化細(xì)胞系在pH 7左右時(shí)表現(xiàn)優(yōu)異,。為了跟蹤細(xì)胞生長(zhǎng)過程中培養(yǎng)基pH值的變化,，在某些情況下使用苯酚紅作為pH值的指示劑，pH值為7.4時(shí)為紅色,。苯酚紅在酸性溶液中變?yōu)槌壬?pH 7)和黃色(pH 6.5),，在堿性溶液中變?yōu)榉凵?pH 7.6)和紫色(pH 7.8),。然而，在活細(xì)胞成像中常用的培養(yǎng)基配方避免使用酚紅,，因?yàn)槠涔馕障庀禂?shù)高，可能造成背景噪音,。

pH緩沖系統(tǒng)通常包含碳酸氫鈉和外部供應(yīng)CO2。此外,，合成的生物緩沖液，如HEPES,，可用于短期研究時(shí)緩沖培養(yǎng)基,。當(dāng)細(xì)胞外溶液不能用HEPES緩沖時(shí),，CO2被輸送到系統(tǒng)，當(dāng)與細(xì)胞外溶液接觸時(shí)分解為碳酸氫鹽,。這就是為什么顯微鏡下的活細(xì)胞成像通常需要專門可調(diào)節(jié)大氣而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)室,。一般情況下,，10-20mM HEPES緩沖液的濃度可以在無CO2存在時(shí)控制pH值，為碳酸氫鈉提供最佳的生長(zhǎng)條件,。

細(xì)胞系對(duì)氧氣的需求量變化很大,。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞在體內(nèi)呼吸通常需要氧氣,，但在體外培養(yǎng)成種子細(xì)胞系或永生化后，通?？梢蕴娲鷧捬跆墙徒狻５蠖鄶?shù)活細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)并不需要嚴(yán)格的O2調(diào)控,。有趣的是,，氧氣的消耗經(jīng)常被用作一種策略,，以減少通過與活性氧的反應(yīng)而發(fā)生的光損傷,。這一策略可能涉及氧氣消耗系統(tǒng)，如氧化酶或抗氧化劑,，如維生素C,，以限制自由基的損害。然而,，在某些情況下,，O2張力降低可能導(dǎo)致缺氧應(yīng)激,，這對(duì)細(xì)胞是有危險(xiǎn)的。

大多數(shù)細(xì)胞系在260 ~ 320 mosM的滲透壓值范圍內(nèi)高效生長(zhǎng)。當(dāng)添加HEPES來改變培養(yǎng)基組分時(shí),，監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的滲透壓是很重要的,。大多數(shù)成像室容納小體積，在培養(yǎng)基溫度較高時(shí),，由于蒸發(fā)作用,，滲透壓會(huì)發(fā)生變化,。在大多數(shù)情況下，顯微鏡有一個(gè)二氧化碳控制的孵育室,，用于在37攝氏度下處理哺乳動(dòng)物細(xì)胞,。低滲培養(yǎng)基可以在培養(yǎng)皿中常規(guī)替代，以補(bǔ)償蒸發(fā),。也可以通過將培養(yǎng)基密封在一個(gè)開放的機(jī)油室或通過控制濕度來最小化蒸發(fā),。

在短期研究中應(yīng)用大體積培養(yǎng)基可以避免由于蒸發(fā)而造成的滲透壓和O2的偏差。長(zhǎng)期研究可采用加熱機(jī)組,、加濕器孵育室、碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)相結(jié)合的方式對(duì)環(huán)境參數(shù)進(jìn)行控制,。

為了更好地解釋活體細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，通常采用先進(jìn)的寬視野和共聚焦顯微鏡技術(shù),。例如,，細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育是在相位對(duì)比和差分干涉對(duì)比(DIC)顯微鏡下觀察的，但發(fā)育胚胎研究有時(shí)更傾向于在立體顯微鏡下觀察,。另一方面，熒光技術(shù)被用來標(biāo)記特定的細(xì)胞化合物,，使它們?cè)诠簿劢癸@微鏡下更容易觀察到,。然而,，活細(xì)胞成像系統(tǒng)被限制在一定的最佳條件下，以確保細(xì)胞保持在健康的狀態(tài),。