谷氨酸脫氫酶（GLDH）是一種能夠催化谷氨酸和α-酮戊二酸相互轉(zhuǎn)化的酶,。血液中GLDH水平升高表明肝臟受損,，因此GLDH在肝病的診斷中發(fā)揮重要作用,，尤其是與轉(zhuǎn)氨酶聯(lián)合使用時(shí),。表達(dá)微生物GLDH的轉(zhuǎn)基因植物在耐除草劑,、耐干旱和抗病原體感染方面表現(xiàn)出更好的耐受性。BioAssay Systems的非放射性比色法GLDH檢測基于NADH偶聯(lián)的酶促反應(yīng),，將四氮唑鹽MTT還原為在565 nm處具有最大吸收峰的還原型MTT,。565 nm處吸光度的增加與酶活性成正比。

作為BioAssay Systems在中國的區(qū)域總代理,，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems熱銷產(chǎn)品谷氨酸脫氫酶測定試劑盒,。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷,。

主要特點(diǎn)

- 快速靈敏。線性檢測范圍（20 uL樣本）：30分鐘反應(yīng)為0.4至80 U/L,，120分鐘反應(yīng)的檢測下限為0.1 U/L,。

- 方便高效。均質(zhì)“混合-孵育-測量"型檢測?？稍诟咄亢Y選液體處理系統(tǒng)上自動(dòng)化操作,，每天可處理數(shù)千個(gè)樣本。

應(yīng)用

用于測定生物樣本（如血漿,、血清,、尿液、組織和培養(yǎng)基）中的GLDH活性,。

試劑盒組成（96孔板,，100次檢測）

- 檢測緩沖液：10 mL

- 二氫硫色素：120 uL

- NAD溶液：1 mL

- 校準(zhǔn)液：1.5 mL

- MTT溶液：1.5 mL

- 底物：1.5 mL（1 M谷氨酸）

儲(chǔ)存條件

試劑盒在室溫下運(yùn)輸。收到后將所有組分儲(chǔ)存于-20°C,。有效期：收到后6個(gè)月,。

注意事項(xiàng)

- 試劑僅供研究使用。使用試劑時(shí)需遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng),。詳細(xì)信息請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表,。

操作步驟

本檢測基于動(dòng)力學(xué)反應(yīng)。為確保孵育時(shí)間一致,，加入工作試劑時(shí)需迅速,，混合需短暫但充分。建議使用多通道移液器,。檢測可在任何所需溫度下進(jìn)行（例如25°C或37°C）,。

樣本準(zhǔn)備

- 血清和血漿可直接檢測。

- 組織：解剖前,，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液,。將50 mg組織在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的緩沖液中勻漿。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘,。取上清液用于檢測,。

- 細(xì)胞裂解液：通過在4°C下以2,000 x g離心5分鐘收集細(xì)胞。對(duì)于貼壁細(xì)胞,，不要使用蛋白酶酶收獲細(xì)胞,，而是使用橡膠刮刀。在含有50 mM磷酸鉀（pH 7.5）的冷緩沖液中適當(dāng)體積中勻漿或超聲處理細(xì)胞,。在4°C下以10,000 x g離心15分鐘,。取上清液用于檢測。

- 所有樣本可在-20°C至-80°C下保存至少一個(gè)月,。

試劑準(zhǔn)備

將試劑平衡至所需反應(yīng)溫度（例如25°C或37°C）,。使用前短暫離心試管。工作試劑（WR）的配制：對(duì)于每次96孔檢測,，將10 uL底物,、14 uL MTT溶液,、9 uL NAD溶液、1 uL二氫硫色素和50 uL檢測緩沖液混合,?？瞻坠ぷ髟噭˙WR）的配制：對(duì)于每次96孔檢測，將14 uL MTT溶液,、9 uL NAD溶液,、1 uL二氫硫色素和60 uL檢測緩沖液混合（即不加底物）。建議現(xiàn)配現(xiàn)用工作試劑,。

反應(yīng)準(zhǔn)備

1. 將100 uL H?O（ODH?O）和100 uL校準(zhǔn)液（ODCAL）溶液分別加入透明平底96孔板的孔中,。

2. 將20 uL樣本分別加入兩個(gè)孔中。向一個(gè)樣本孔中加入80 uL WR,，向另一個(gè)樣本孔中加入80 uL BWR,。輕輕敲擊孔板以混合。

3. 在酶標(biāo)儀上讀取565 nm處的吸光度（OD?）,，30分鐘后再次讀?。∣D??）。

所需材料（但未提供）

移液裝置及配件（如多通道移液器）,、透明平底96孔板（如Corning Costar）,、離心管和酶標(biāo)儀。

文獻(xiàn)：

1. Chou, KH and WE Splittstoesser, WE (1972) Glutamate dehydrogenase from pumpkin cotyledons characterization and

isoenzymes. Plant Physiol. 49: 550-4.

2. Yamaya, T et. al. (1984). Characteristics of glutamate dehydrogenase in mitochondria prepared from corn shoots. Plant Physiol. 76: 1009-13.

3. Cho, SW et. al. (1995). Two soluble forms of glutamate dehydrogenase isoproteins from bovine brain. Eru. J. Biochem. 233:340-6.

BioAssay Systems是一家位于美國北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司,，專注于研發(fā),、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測試劑盒，產(chǎn)品種類齊全,，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā),，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn),，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測試劑盒,。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測定,；3.能量代謝,；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑,；6.陰陽離子檢測,。

作為BioAssay Systems在中國區(qū)域的代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BioAssay Systems產(chǎn)品,。

谷氨酸脫氫酶測定試劑盒谷氨酸脫氫酶測定試劑盒