谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST）是一種多功能酶，在細(xì)胞解毒過(guò)程中發(fā)揮重要作用,。GST通過(guò)催化谷胱甘肽（GSH）與外源化合物（如致癌物和藥物）的親電和/或疏水位點(diǎn)結(jié)合,，保護(hù)細(xì)胞免受這些有害物質(zhì)的損害。

BioAssay Systems的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶試劑盒基于GSH與GST底物CDNB 之間的酶促反應(yīng),。GST催化形成的GS-DNB產(chǎn)生了一個(gè)二硝基苯硫醚,，該產(chǎn)物可以在340 nm處通過(guò)光譜光度法檢測(cè)。340 nm處吸光度的增加速率與樣本中的GST活性成正比,。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理,，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems銷(xiāo)售產(chǎn)品谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶試劑盒。產(chǎn)品僅用于科研,，不可用于臨床診斷,。

主要特點(diǎn)

- 快速靈敏。線性檢測(cè)范圍（20 uL樣本）：在25°C下10分鐘反應(yīng),，檢測(cè)范圍為2至80 U/L,。

- 方便高效。均質(zhì)“混合-孵育-測(cè)量"型檢測(cè),?？稍诟咄亢Y選液體處理系統(tǒng)上自動(dòng)化操作，每天可處理數(shù)千個(gè)樣本,。

應(yīng)用

用于測(cè)定生物樣本（如細(xì)胞裂解液,、組織等）中的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性。

試劑盒組成（96孔板,，100次檢測(cè)）

- 檢測(cè)緩沖液：25 mL

- 谷胱甘肽：粉末

- CDNB：120 uL

儲(chǔ)存條件

試劑盒在室溫下運(yùn)輸,。收到后將所有組分儲(chǔ)存于4°C,。有效期：收到后6個(gè)月。

注意事項(xiàng)

- 試劑僅供研究使用,。使用試劑時(shí)需遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng),。詳細(xì)信息請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表。

操作步驟

本檢測(cè)基于動(dòng)力學(xué)反應(yīng),。為確保孵育時(shí)間一致,，加入工作試劑時(shí)需迅速，混合需短暫但充分,。建議使用多通道移液器,。檢測(cè)可在任何所需溫度下進(jìn)行（例如25°C或37°C）。

樣本準(zhǔn)備

- 組織：解剖前,，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）沖洗組織以去除血液,。將50 mg組織在含有2 mM EDTA的冷100 mM磷酸鉀緩沖液（pH 7.0）中用Dounce勻漿器勻漿。將勻漿后的組織在-80°C下冷凍以裂解細(xì)胞,。解凍后,，在4°C下以10,000 × g離心15分鐘。取上清液用于檢測(cè),。

- 細(xì)胞裂解液：通過(guò)在4°C下以2,000 × g離心5分鐘收集細(xì)胞（約400萬(wàn)細(xì)胞）,。對(duì)于貼壁細(xì)胞，不要使用蛋白酶酶收獲細(xì)胞,，而是使用橡膠刮刀,。在含有100 mM磷酸鉀（pH 7.0）和2 mM EDTA的冷緩沖液中適當(dāng)體積中勻漿或超聲處理細(xì)胞。在4°C下以10,000 × g離心15分鐘,。取上清液用于檢測(cè),。

- 所有樣本可在-20°C至-80°C下保存至少一個(gè)月。

檢測(cè)步驟

1. 試劑準(zhǔn)備：在檢測(cè)前將所有試劑平衡至所需反應(yīng)溫度（例如25°C）,。使用前短暫離心試管,。用120 uL去離子水溶解谷胱甘肽，渦旋混合,。未使用的谷胱甘肽試劑在-20°C下冷凍可穩(wěn)定保存三周,。

2. 將每個(gè)樣本的20 uL分別加入不同的孔中。

3. 按每孔計(jì)算,，將184 uL檢測(cè)緩沖液,、1 uL溶解后的谷胱甘肽和1 uL CDNB混合，制備足夠所有反應(yīng)孔的工作試劑（WR）,。向所有樣本孔中加入180 uL WR，輕輕敲擊孔板以混合,。

4. 在0分鐘時(shí)讀取340 nm處的吸光度（OD???nm）,，并在0至10分鐘之間至少再讀取四個(gè)時(shí)間點(diǎn)的吸光度,。如果條件允許，建議使用能夠進(jìn)行動(dòng)力學(xué)測(cè)量的酶標(biāo)儀,，并設(shè)置為每分鐘讀取一次340 nm處的吸光度,，持續(xù)10分鐘。

所需材料（但未提供）

移液裝置,、離心管,、透明平底96孔板（如VWR貨號(hào)82050-760）和酶標(biāo)儀。

實(shí)驗(yàn)示例

文獻(xiàn)：

1. Csiszár, Jolán, et al. (2014). Glutathione transferase supergene family in tomato: Salt stress-regulated expression of representative genes from distinct GST classes in plants primed with salicylic acid. Plant Physiology and Biochemistry 78: 15-26.

2. Smeyne, Michelle, and Richard Jay Smeyne. (2013). Glutathione metabolism and Parkinson's disease. Free Radical Biology and Medicine 62: 13-25.

3. Watson, Mary A., et al. (1998). Human glutathione S-transferase P1 polymorphisms: relationship to lung tissue enzyme activity and population frequency distribution. Carcinogenesis 19.2: 275-280.

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司,，專(zhuān)注于研發(fā),、生產(chǎn)和銷(xiāo)售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類(lèi)齊全,，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開(kāi)發(fā),，以滿(mǎn)足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過(guò)50年的豐富經(jīng)驗(yàn),，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了超過(guò)250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒,。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定,；3.能量代謝,；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑,；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè),。

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