羥脯氨酸是一種d特的修飾氨基酸,，僅存在于幾種動(dòng)物蛋白中，其中最常見的是膠原蛋白,。膠原蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)蛋白,，因其驚人的強(qiáng)度而廣泛存在于結(jié)締組織中。由于膠原蛋白在動(dòng)物中作為關(guān)鍵結(jié)構(gòu)蛋白的作用，它在許多醫(yī)學(xué)應(yīng)用中至關(guān)重要,，例如組織移植和復(fù)雜細(xì)胞培養(yǎng)的支架,。膠原蛋白也用于美容行業(yè)，因?yàn)樗梢匝a(bǔ)充以增加組織的硬度,，從而使皮膚看起來更年輕,。

BioAssay Systems的羥脯氨酸檢測(cè)試劑盒提供了一種安全、簡(jiǎn)單且靈敏的方法,，用于定量檢測(cè)樣本中的羥脯氨酸,。在此方法的第一步中,，樣本中的羥脯氨酸被氧化為吡咯環(huán),。然后該化合物與染料試劑反應(yīng)，產(chǎn)生一種可在560 nm處測(cè)量的粉紅色產(chǎn)物,。羥脯氨酸幾乎僅存在于膠原蛋白中,，因此羥脯氨酸含量可以用作膠原蛋白含量的替代指標(biāo)。

作為BioAssay Systems在中國(guó)的區(qū)域總代理,，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BioAssay Systems銷售產(chǎn)品羥脯氨酸測(cè)定試劑盒,。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷,。

主要特點(diǎn)

- 安全,。本羥脯氨酸檢測(cè)采用改進(jìn)的無(wú)高氯酸化學(xué)方法。

- 靈敏且準(zhǔn)確,。使用20 uL樣本,。96孔板檢測(cè)的線性檢測(cè)范圍為0.5 ug/mL至50 ug/mL羥脯氨酸。

- 方便,。膠原蛋白可以在Eppendorf管中水解,，最終孵育可在37°C進(jìn)行。

應(yīng)用

- 直接檢測(cè)：生物和化妝品樣本中的羥脯氨酸和膠原蛋白,。

試劑盒組成（96孔板,，100次檢測(cè)）

- 試劑A：1 mL

- 氧化緩沖液：10 mL

- 試劑B：10 mL

- 羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品：200 uL

儲(chǔ)存條件

試劑盒在室溫下運(yùn)輸。收到后將試劑盒組分儲(chǔ)存于4°C,。有效期：收到后12個(gè)月,。

注意事項(xiàng)

- 試劑僅供研究使用。打開前短暫離心試管,。檢測(cè)前將所有組分平衡至室溫,。使用試劑時(shí)需遵循實(shí)驗(yàn)室試劑的常規(guī)注意事項(xiàng)。詳細(xì)信息請(qǐng)參閱材料安全數(shù)據(jù)表,。

操作步驟

膠原蛋白樣本水解：本試劑盒檢測(cè)游離羥脯氨酸,，因此任何含有膠原蛋白的樣本在檢測(cè)前必須進(jìn)行水解,。為了水解樣本,，將50 uL樣本與50 uL 10N NaOH在Eppendorf管中混合。將管置于100?C加熱1小時(shí)（注意：固體樣本可能需要更長(zhǎng)時(shí)間的水解）。讓管冷卻,，然后用50 uL 10N HCl中和。用150 uL去離子水將樣本按1:1稀釋,。離心管2分鐘,，將所有液體收集到管中并沉淀雜質(zhì)。

生物液體樣本（例如血清,、細(xì)胞,、尿液、組織裂解液）：首先離心以去除任何顆粒物,?？赡苄枰M(jìn)行系列稀釋，以確保樣本在試劑盒的檢測(cè)范圍內(nèi),。

96孔板操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：通過將20 uL 1 mg/mL羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品與380 uL去離子水混合,，制備50 ug/mL羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品。然后按照下表描述,，在1.5-mL離心管中制備標(biāo)準(zhǔn)品,。

2. 將20 uL標(biāo)準(zhǔn)品和樣本分別加入透明平底96孔板的不同孔中。

3. 每孔將8 uL試劑A與90 uL氧化緩沖液混合,。向每孔加入90 uL該混合液,。輕拍孔板以混合，并在室溫下孵育10分鐘,。

4. 向所有孔中加入90 uL試劑B,。加入試劑B后，孔會(huì)變得渾濁,，您必須上下移液,，直到渾濁消散。

5. 在37°C的酶標(biāo)儀或孵育箱中孵育90分鐘,。

6. 在λ = 560 nm處讀取吸光度（OD）,。使用90分鐘時(shí)間點(diǎn)的OD值進(jìn)行分析。

所需材料（但未提供）

移液裝置,、離心管,、10 N NaOH和HCl、透明平底96孔板,、酶標(biāo)儀,、加熱塊或熱水浴、孵育箱,。

實(shí)驗(yàn)示例

96孔板中的羥脯氨酸和膠原蛋白檢測(cè)

文獻(xiàn)：

1. Parenteau-Bareil, R., Gauvin, R., & Berthod, F. (2010). Collagenbased biomaterials for tissue engineering applications. Materials, 3(3),1863-1887.

2. Chattopadhyay, S., & Raines, R. T. (2014). Collagen-Based Biomaterials for Wound Healing. Biopolymers, 101(8), 821.

3. Lee, A., et al (2019). 3D bioprinting of collagen to rebuild components of the human heart. Science, 365(6452), 482-487.

BioAssay Systems是一家位于美國(guó)北加州灣區(qū)的高新技術(shù)生物技術(shù)公司,，專注于研發(fā)、生產(chǎn)和銷售高品質(zhì)的生化檢測(cè)試劑盒，產(chǎn)品種類齊全,，主要用于科學(xué)研究和生物醫(yī)藥開發(fā),，以滿足生命科學(xué)行業(yè)日益增長(zhǎng)的需求。BioAssay Systems在現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域擁有超過50年的豐富經(jīng)驗(yàn),，已經(jīng)開發(fā)了超過250種用于藥物發(fā)現(xiàn)和生命科學(xué)研究的檢測(cè)試劑盒,。產(chǎn)品主要包括：1.血液尿液化學(xué)；2.酶活性測(cè)定,；3.能量代謝,；4.氧化應(yīng)激；5.高通量HTS試劑,；6.陰陽(yáng)離子檢測(cè),。

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