Hypoxyprobe?-1 RED 549套件組件的詳細(xì)描述

1) Hypoxyprobe?-1是一種替代的2-硝基咪唑，其化學(xué)名稱(chēng)為皮莫尼達(dá)唑鹽酸鹽，分子量為290.8；水溶性為400毫摩爾（116毫克/毫升）,；在324納米處有紫外吸收（在0.9%的鹽水中消光系數(shù)為7020）。其游離堿基,，皮莫尼達(dá)唑,，分子量為254.3，pKa值為8.7,，辛醇水分配系數(shù)為8.5,。固體Hypoxyprobe?-1在室溫下在柔和光線中儲(chǔ)存兩年，并且在4攝氏度的0.9%鹽水（100克/升）中儲(chǔ)存4.5年,，未檢測(cè)到降解（紫外和HPLC分析）,。皮莫尼達(dá)唑在缺氧細(xì)胞中被還原激活，并與蛋白質(zhì),、肽和氨基酸中的硫醇（巰基）基團(tuán)形成穩(wěn)定的加合物,。RED 549染料-MAb1與這些加合物結(jié)合，允許通過(guò)免疫化學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè),。

2) RED 549染料-MAb1是一種與染料結(jié)合的大鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆4.3.11.3）,，在含有1%牛血清白蛋白和0.09%疊D化鈉的PBS中以0.5毫克/毫升的濃度供應(yīng)，作為穩(wěn)定劑,。感興趣的組織可以通過(guò)免疫組織化學(xué)在冷凍固定切片或福爾馬林固定的石蠟包埋切片上進(jìn)行研究,，或者在組織解離后通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行研究。注意：RED 549染料-MAb1與皮莫尼達(dá)唑的蛋白質(zhì),、肽和氨基酸加合物結(jié)合,，但在免疫組織化學(xué)處理過(guò)程中，肽和氨基酸加合物會(huì)被沖洗掉,，因此免疫組織化學(xué)的缺氧檢測(cè)依賴于缺氧組織中皮莫尼達(dá)唑的蛋白質(zhì)加合物,。

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Hypoxyprobe Red 549套件：

應(yīng)用：用于細(xì)胞和組織缺氧的免疫化學(xué)檢測(cè)，包括免疫熒光,、免疫過(guò)氧化物酶或流式細(xì)胞術(shù),。Hypoxyprobe?-1 RED 549試劑盒在福爾馬林固定的石蠟包埋的大鼠腫瘤組織中提供強(qiáng)烈的免疫染色和極低的背景。

數(shù)量：a. Hypoxyprobe?-1 RED 549試劑盒含有100毫克,、200毫克或1000毫克的Hypoxyprobe?-1（皮莫尼達(dá)唑鹽酸鹽）,。通常，動(dòng)物研究中使用的劑量為每公斤體重60毫克,。

b. 一個(gè)瓶（100毫克和200毫克試劑盒）或兩個(gè)瓶（1000毫克試劑盒）含有200微升稀釋的RED 549染料結(jié)合的IgG1大鼠單克隆抗皮莫尼達(dá)唑抗體（克隆4.3.11.3）,。每個(gè)瓶含有200微升的RED 549染料-MAb1在PBS中的0.50毫克/毫升溶液，含有1%的牛血清白蛋白和0.09%的疊D化鈉,。RED 549染料-MAb1的最佳稀釋度應(yīng)由研究者確定,，但發(fā)現(xiàn)1:50-100的稀釋度在大鼠腫瘤組織中能給出強(qiáng)烈的免疫熒光染色。特別為免疫熒光設(shè)計(jì)的RED 549染料-MAb1可以在熒光顯微鏡下觀察,，或在流式細(xì)胞術(shù)和西方印跡應(yīng)用中使用,。通常免疫熒光的抗體稀釋度比免疫過(guò)氧化物酶檢測(cè)系統(tǒng)中使用的要低。

不提供：用于免疫組化分析的標(biāo)準(zhǔn)試劑,。

儲(chǔ)存：a. 將Hypoxyprobe?-1固體存放在室溫下避光處,。（也可以存放在2-8攝氏度的黑暗中）。

b. 將RED 549染料-MAb存放在2-8攝氏度的黑暗中,。不要冷凍,。

檢測(cè)說(shuō)明

1. 對(duì)正常或腫瘤組織缺氧的調(diào)查始于通過(guò)靜脈輸注,、腹腔注射或口服給予Hypoxyprobe?-1（皮莫尼達(dá)唑鹽酸鹽）溶液,，劑量為每公斤體重60毫克。對(duì)于一只25克的大鼠,，這相當(dāng)于每只大鼠1.5毫克,。在小鼠中使用了高達(dá)400毫克/公斤的劑量，未檢測(cè)到毒性或組織缺氧的變化,，但60毫克/公斤可以在低成本下獲得良好的免疫染色,。Hypoxyprobe?-1在鹽水中的溶解度為116毫克/毫升，因此可以使用非常小的體積來(lái)施用Hypoxyprobe?-1,。注射或攝取后,，Hypoxyprobe?-1分布到所有組織，包括大腦,，但它只與那些氧氣濃度低于14微摩爾的細(xì)胞中的含硫蛋白質(zhì)形成加合物——相當(dāng)于在37攝氏度下的部分壓力pO2 = 10毫米汞柱,。除了腫瘤，正常組織如肝臟,、腎臟和皮膚也擁有pO2 = 10毫米汞柱的細(xì)胞或低于此值的細(xì)胞,。這些正常組織會(huì)結(jié)合Hypoxyprobe?-1,。小鼠體內(nèi)Hypoxyprobe?-1的血漿半衰期大約為25分鐘。相比之下,，大鼠的血漿半衰期為45分鐘，狗為90分鐘,，人類(lèi)為300分鐘,。感興趣的大鼠組織可在給予Hypoxyprobe?-1后15至90分鐘內(nèi)采集。在采集時(shí)組織中的Hypoxyprobe?-1將在組織解離時(shí)被結(jié)合,，但與組織在15至90分鐘實(shí)驗(yàn)期間暴露的量相比,，殘留的Hypoxyprobe?-1的量非常小，因此由于殘留的Hypoxyprobe?-1引起的任何非特異性結(jié)合是不可檢測(cè)的,。除了動(dòng)物研究,，Hypoxyprobe?套件也可用于組織培養(yǎng)中的細(xì)胞。通常,，細(xì)胞懸浮液在缺氧條件下與100至200微摩爾的Hypoxyprobe?-1一起孵育1至2小時(shí),。通過(guò)細(xì)胞涂片、固定和用RED 549 MAb-1免疫染色來(lái)收集細(xì)胞,。使用FITC結(jié)合的抗皮莫尼達(dá)唑大鼠單克隆抗體對(duì)福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片中的皮莫尼達(dá)唑加合物進(jìn)行免疫染色的建議方案,。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專(zhuān)注于研發(fā)非侵略性的缺氧標(biāo)志物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細(xì)胞因子，所有產(chǎn)品皆基于Pimonidazole核心結(jié)構(gòu)來(lái)開(kāi)發(fā),。 使用Pimonidazole HCl作為缺氧標(biāo)記物,，廣泛用在狗、大小鼠,。缺氧探針試劑盒核心組分為：缺氧探針（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探針的抗體,。不同試劑盒中的探針和抗體標(biāo)記不同（可應(yīng)用于免疫熒光（IF），免疫組化（IHC）,，WB或流式細(xì)胞分析（FC））

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中國(guó)代理商,，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。

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