全人IgA ELISA試劑盒是一種高靈敏度的雙位點(diǎn)酶聯(lián)免疫測(cè)定（ELISA）用于測(cè)定人血清或血漿中的IgA,。僅供研究使用,。不適用于診斷程序,。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理,，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品IgA(人)ELISA試劑盒,，96w,。產(chǎn)品僅用于科研,，不可用于臨床診斷。

IgA(人)ELISA試劑盒,，96w檢測(cè)原理：

雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）的原理如圖1所示。在這種測(cè)定中,，樣本中的IgA與吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgA抗體發(fā)生反應(yīng),。通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)后，加入與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）偶聯(lián)的抗IgA抗體,。這些酶標(biāo)記的抗體與之前結(jié)合的IgA形成復(fù)合物,。經(jīng)過(guò)另一次洗滌步驟后，通過(guò)添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）來(lái)測(cè)定結(jié)合的酶,。結(jié)合酶的量與測(cè)試樣本中IgA的濃度直接相關(guān),；因此,，450納米處的吸光度是測(cè)試樣本中IgA濃度的量度。測(cè)試樣本中IgA的量可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值得到,，并根據(jù)樣本稀釋進(jìn)行校正,。

樣本收集和處理

所有血液成分和生物材料應(yīng)視為潛在危險(xiǎn)物。處理和處置時(shí)應(yīng)遵循通用預(yù)防措施,。如果血液樣本出現(xiàn)凝塊,、嚴(yán)重溶血、脂血或樣本完整性存疑,，請(qǐng)做好記錄并謹(jǐn)慎解釋結(jié)果,。以下列出的樣本收集和儲(chǔ)存條件僅供參考。樣本穩(wěn)定性未經(jīng)評(píng)估,。

血清樣本 - 應(yīng)通過(guò)靜脈穿刺收集血液。血液凝固后通過(guò)離心分離血清,。取出血清后立即進(jìn)行測(cè)定或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C,。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

血漿樣本 - 應(yīng)將血液收集到含有抗凝劑的容器中,，然后進(jìn)行離心,。立即進(jìn)行測(cè)定或分裝后儲(chǔ)存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán),。

已知干擾物質(zhì) - 疊氮化物和硫柳汞在高于0.1%的濃度時(shí)會(huì)抑制酶反應(yīng),。

樣本稀釋

測(cè)定要求每個(gè)樣本在使用前進(jìn)行稀釋。每次進(jìn)行測(cè)定時(shí),，所有樣本應(yīng)進(jìn)行雙重測(cè)定,。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋應(yīng)基于未知樣本的預(yù)期濃度,，以使稀釋后的樣本落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi),。如果不確定樣本水平，強(qiáng)烈建議在運(yùn)行整個(gè)板之前,，先用一個(gè)或兩個(gè)代表性樣本進(jìn)行系列稀釋測(cè)定,。

血清和血漿樣本 - 建議起始稀釋比例為1:10,000。要制備1:10,000的y本稀釋液,，將5微升樣本轉(zhuǎn)移到495微升1X稀釋液中,。接下來(lái)，將1:100的樣本通過(guò)將5微升轉(zhuǎn)移到495微升1X稀釋液中進(jìn)行稀釋,。這得到1:10,000的y本稀釋液,。每個(gè)階段都要c底混合。

試劑準(zhǔn)備

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）,。

稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液是5倍濃縮液,，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液,，4份dH2O）稀釋1:5。

洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液是20倍濃縮液,，必須用蒸餾水或去離子水（1份緩沖液濃縮液,，19份dH2O）稀釋1:20。濃縮液在儲(chǔ)存溫度低時(shí)可能會(huì)形成晶體,。稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解晶體,。

酶-抗體結(jié)合物 - 通過(guò)向每個(gè)微孔板測(cè)試條添加10微升酶-抗體結(jié)合物到990微升1X稀釋液中，計(jì)算每個(gè)微孔板測(cè)試條所需的工作結(jié)合物溶液量,。均勻混合,，但要輕柔。避免起泡,。

預(yù)涂覆ELISA微孔板 - 按提供狀態(tài)使用,。打開(kāi)箔袋，從袋中取出板,。取出在測(cè)定中不會(huì)使用的所有條和孔,，放回袋中并重新密封，連同干燥劑一起,。

人類IgA校準(zhǔn)液 - 根據(jù)批次特定的分析證明書進(jìn)行準(zhǔn)備,。

結(jié)果計(jì)算

從每個(gè)孔的值中減去平均背景值（標(biāo)準(zhǔn)零的平均吸光度讀數(shù)）。

平均每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的雙重讀數(shù),，并使用結(jié)果構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,。通過(guò)使用能夠生成四參數(shù)邏輯曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來(lái)減少數(shù)據(jù)，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,。也可以使用二階多項(xiàng)式（二次）或其他曲線擬合,；然而，它們對(duì)數(shù)據(jù)的擬合精度會(huì)較低,。

從標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值樣本值,。校正稀釋因子，得出原始樣本中的IgA濃度,。

ALPCO產(chǎn)品種類多樣,，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠,、豚鼠,、兔、豬,、羊,、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué),、骨代謝,、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、糖尿病和肥胖癥,、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能,、腸胃病學(xué),、免疫學(xué)、生殖激素,、抗體和抗原,、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng),。

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