瘦素,，OB基因的產物（1,2）,，是一種單鏈蛋白激素,，分子量為16kD,，被認為在調節(jié)體重中發(fā)揮關鍵作用,。它的氨基酸序列與其他蛋白質沒有明顯的同源性（1）,。瘦素幾乎只由分化的脂肪細胞產生（3-5）,。它作用于中樞神經系統(tǒng)，特別是下丘腦,，從而抑制食物攝入和刺激能量消耗,。瘦素受體存在不同的選擇性剪接形式，長度不同,，屬于細胞因子類I受體家族,。它們在全身廣泛分布，表明瘦素具有目前尚未w全理解的一般作用,。存在一種循環(huán)形式的瘦素受體,，它作為多種瘦素結合蛋白之一,。除了其代謝效應外，瘦素還被證明對許多內分泌軸有強烈影響,。在雄性小鼠中,，它減弱了饑餓引起的LH、睪酮,、甲狀腺素的顯著下降,，以及ACTH和p質醇的增加。在雌性小鼠中,，瘦素防止了饑餓引起的排卵延遲,。由于OB基因突變而缺乏瘦素的Ob/ob小鼠不育。這種缺陷可以通過瘦素的給藥來糾正,，但通過禁食減肥則不能,，這表明瘦素對生殖功能至關重要。所有這些作用至少部分可以通過瘦素對下丘腦弓狀核神經元中神經肽Y（NPY）表達和分泌的抑制作用來解釋,。NPY是食欲的強烈刺激因子,，已知它參與調節(jié)各種垂體激素，例如通過刺激生長y素抑制GH,，抑制促x腺激素或刺激垂體-腎上腺軸,。決定循環(huán)瘦素水平的最重要變量是體脂肪質量。在規(guī)律飲食周期的條件下,，瘦素反映了脂肪組織的比例,，顯示出指數(shù)關系。這種構成性的瘦素合成被許多非激素和激素變量調節(jié),。在嚙齒動物和人類中,，過度進食、胰島素和糖皮質激素是刺激因子,。已經顯示了禁食,、cAMP和β-3-腎上腺素受體激動劑的抑制作用。從這些發(fā)現(xiàn)中可以清楚地看出,，瘦素是各種代謝和內分泌反饋循環(huán)的一個組成部分,。血清瘦素水平顯示出適度的晝夜變化，在夜間大約凌晨2點左右達到峰值,。此時的瘦素值比早上或下午早些時候測量的水平高出約30到100%,。這種變化，連同食物攝入的影響,，需要在收集血液樣本時考慮,。這種ELISA試劑盒適用于測定血清或血漿中的人瘦素，其他生物流體（例如唾液,、尿液或母乳）,，以及用于研究目的的條件脂肪細胞培養(yǎng)基中的瘦素,。

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瘦素超敏ELISA, 96孔檢測原理：

瘦素ELISA（超靈敏）是一種使用兩種特異性和高親和力抗體的夾心測定法,。樣品中的瘦素與包被在微量滴定板上的第一抗體結合,。在接下來的步驟中，第二特異性抗瘦素抗體依次與固定的瘦素結合,。第二種抗體被生物s化,，并與鏈霉抗生物s蛋白-過氧化物酶結合物結合。在封閉底物反應中,，顏色變化將根據(jù)樣品中的瘦素水平定量催化,。

技術說明

必須嚴格按照測試協(xié)議進行測定。不能混合不同批號的試劑,。使用前將所有試劑置于室溫（20 - 25°C）,。使用前必須通過混合和/或加熱解決緩沖液中可能的沉淀問題。儲存和保質期如果未開封并存放在2-8 °C并避免陽光直射,，微孔板和試劑的穩(wěn)定性可保持至標示的有效期,。重組后的凍干試劑應存放在-20°C。避免反復凍融,。組分開封后的使用期限為4周,。未使用的試紙條和微孔井應與干燥劑一起密封存放在2-8 °C的密封袋中，并使用提供的框架,。重組后的組分：校準品A-E和對照CTR1及CTR2必須存放在-20°C（最多4周）,。再次使用時，應快速但輕柔地解凍（避免溫度升高超過室溫并避免過度渦旋）,。最多3次凍融循環(huán)不影響測定,。1X工作洗滌緩沖液WB在2-8°C下穩(wěn)定4周。重組校準品A-E和對照CTR1及CTR2用稀釋緩沖液DIL重組,。建議將重組試劑在室溫下放置15分鐘，然后使用渦旋混合器c底但輕柔地（不應產生泡沫）混合,。孵育在室溫下孵育意味著：在20 - 25°C下孵育,。底物S，穩(wěn)定的四甲基聯(lián)苯胺,，對光敏感——存放和孵育時應避光,。搖動孵育步驟應在合適的微孔板振蕩器的平均旋轉頻率下進行。建議使用350轉/分鐘,。由于振蕩器之間的差異,，可能需要優(yōu)化旋轉頻率,。搖動不足可能導致溶液混合不充分，從而導致光學密度低,、變異性高和/或假值,。搖動過度可能導致光學密度高和/或假值。稀釋通過將提供的20倍濃縮液與蒸餾水按1:20稀釋來準備所需的1X工作洗滌緩沖液WB,。重組后,，將對照CTR1和CTR2與稀釋緩沖液DIL按相同比例（1:10）稀釋，與樣本相同,。

典型校準曲線示例：

圖1：具有多項式二次曲線擬合的示例性標準曲線,。

文獻參考：

1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning ofthe mouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.

2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma proteinencoded by the obese gene. Science. 269:543-546.

3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.

4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBSLett. 379:55-59. 

5. Wabitsch M, Jensen PB, Blum WF, et al. 1996 Insulin and cortisol promote leptin production incultured human fat cells. Diabetes. 45:1435-1438. 

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人,、大/小鼠,、豚鼠、兔,、豬,、羊、狗,、猴等,，涉及神經生物學、骨代謝,、心血管疾病和氧化應激,、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥,、內分泌學,、甲狀腺功能、腸胃病學,、免疫學,、生殖激素、抗體和抗原,、分子診斷等多個研究領域,，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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