瘦素,，ob基因的產(chǎn)物（1,2）,，是一種分子量為16 kD的單鏈蛋白激素,。它被認(rèn)為在體重調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它的氨基酸序列與其他蛋白質(zhì)沒(méi)有顯著的同源性（1）,。瘦素幾乎只由分化的脂肪細(xì)胞產(chǎn)生,。它作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),，特別是下丘腦，抑制食物攝入并刺激能量消耗,。瘦素受體——不同長(zhǎng)度的替代剪接形式——屬于細(xì)胞因子類(lèi)I受體家族,。它們?cè)谌韽V泛分布，表明瘦素具有目前尚未w全理解的一般作用,。存在一種循環(huán)形式的瘦素受體,，它作為多種瘦素結(jié)合蛋白之一。除了其代謝效應(yīng)外,，瘦素還被證明影響多個(gè)內(nèi)分泌軸,。在雄性小鼠中，它減弱了饑餓引起的LH,、睪酮,、甲狀腺素的顯著下降，以及ACTH和p質(zhì)醇的增加,。在雌性小鼠中，瘦素防止了饑餓引起的排卵延遲,。由于ob基因突變而缺乏瘦素的Ob/ob小鼠不育,。這種缺陷可以通過(guò)瘦素的給藥來(lái)糾正，但通過(guò)禁食減肥則不能,，這表明瘦素對(duì)生殖功能至關(guān)重要,。所有這些作用至少部分可以通過(guò)瘦素對(duì)下丘腦弓狀核神經(jīng)元中神經(jīng)肽Y（NPY）表達(dá)和分泌的抑制作用來(lái)解釋。NPY是食欲的強(qiáng)烈刺激因子,，已知它參與調(diào)節(jié)各種垂體激素,，例如通過(guò)刺激生長(zhǎng)y素抑制GH，抑制促x腺激素或刺激垂體-腎上腺軸,。決定循環(huán)瘦素水平的最重要變量是體脂肪質(zhì)量,。在規(guī)律飲食周期的條件下，瘦素反映了脂肪組織的比例,，顯示出指數(shù)關(guān)系,。這種構(gòu)成性的瘦素合成被許多非激素和激素變量調(diào)節(jié)。在嚙齒動(dòng)物和人類(lèi)中,，過(guò)度進(jìn)食,、高脂飲食、胰島素和糖皮質(zhì)激素是刺激因子,。已經(jīng)顯示了禁食,、cAMP和β-3-腎上腺素受體激動(dòng)劑的抑制作用。從這些發(fā)現(xiàn)中可以清楚地看出,，瘦素是各種代謝和內(nèi)分泌反饋循環(huán)的一個(gè)組成部分）,。

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一種酶免疫測(cè)定試劑盒，適用于定量測(cè)定小鼠和大鼠血清或血漿中的瘦素，用于科學(xué)目的,。僅供研究使用,。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理,，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷(xiāo)產(chǎn)品小鼠/大鼠瘦素EIA(96孔),。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷,。

小鼠/大鼠瘦素EIA(96孔)檢測(cè)原理：

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一種所謂的夾心法,。它利用兩種不同的特異性高親和力多克隆抗體來(lái)治療這種蛋白質(zhì)。樣本中的瘦素與固定化抗體定量結(jié)合,。在接下來(lái)的步驟中,，生物s化抗體又與瘦素結(jié)合。洗滌后,，加入鏈霉抗生物s蛋白-過(guò)氧化物酶偶聯(lián)物,，其對(duì)生物s具有高度特異性，并與抗體的生物s結(jié)合,。隨后,，過(guò)氧化物酶催化酶反應(yīng)，導(dǎo)致藍(lán)色,。藍(lán)色的強(qiáng)度取決于樣品的瘦素含量,。通過(guò)加入終止溶液來(lái)終止反應(yīng)，并通過(guò)測(cè)量吸收來(lái)量化顏色強(qiáng)度,。

技術(shù)說(shuō)明

1 儲(chǔ)存條件

收到試劑盒后,，在其有效期內(nèi)，將其存放在2-8°C,。重組后的凍干試劑應(yīng)存放在-20°C,。避免反復(fù)凍融。

2 儲(chǔ)存壽命

組分開(kāi)封后的使用期限保證為4周,。未使用的試紙條和微孔板應(yīng)與干燥劑一起密封存放在2-8°C的夾鎖袋中,，并使用提供的框架。重組后的組分應(yīng)存放在-20°C（或更冷）,。再次使用時(shí),，應(yīng)快速但輕柔地解凍（避免溫度升高超過(guò)室溫并避免過(guò)度渦旋）。只能冷凍一次,！1:20稀釋的工作洗滌緩沖液WP在2-8°C下穩(wěn)定4周,。

3 試劑準(zhǔn)備

使用前將所有試劑置于室溫（20 - 25°C）。緩沖液中的沉淀在使用前必須通過(guò)混合和/或加熱溶解,。不能混合不同批次的試劑,。

4 重組

標(biāo)準(zhǔn)品A – G和對(duì)照KS用稀釋緩沖液VP重組,。建議將重組后的試劑在室溫下放置15分鐘，然后使用渦旋混合器c底但輕柔地（不應(yīng)產(chǎn)生泡沫）混合,。只能冷凍一次,！

5 稀釋

重組后，將對(duì)照KS與稀釋緩沖液VP按相同比例（1:5）稀釋?zhuān)c樣本相同,。所需體積的工作洗滌緩沖液WP是通過(guò)將20倍濃縮液與蒸餾水按1:20稀釋來(lái)準(zhǔn)備的,。稀釋1:20的洗滌緩沖液WP穩(wěn)定4周。

6 測(cè)定程序

進(jìn)行測(cè)定時(shí),，空白,、標(biāo)準(zhǔn)品A-G、對(duì)照KS和樣本應(yīng)盡可能快地（例如,，<15分鐘）移液,。為避免由于孵育時(shí)間差異導(dǎo)致的失真，抗體結(jié)合物AK,、酶結(jié)合物EK以及隨后的底物溶液S應(yīng)與樣本以相同的順序和相同的時(shí)間間隔添加到板中,。停止溶液SL應(yīng)與底物溶液以相同的順序添加到板中。所有測(cè)定（空白,、標(biāo)準(zhǔn)品A-G,、對(duì)照KS和樣本）應(yīng)進(jìn)行雙重測(cè)定。為獲得最佳結(jié)果,，建議準(zhǔn)確移液并遵守操作規(guī)程。

7 孵育

室溫孵育意味著在20 – 25°C下孵育,。底物溶液S,，穩(wěn)定的四甲基聯(lián)苯胺，對(duì)光敏感,；存放和孵育時(shí)應(yīng)避光,。

8 搖動(dòng)

孵育步驟應(yīng)在特別適合的微孔板振蕩器的平均旋轉(zhuǎn)頻率下進(jìn)行。建議將振蕩器設(shè)置為350轉(zhuǎn)/分鐘,。由于振蕩器之間的技術(shù)差異,，可能需要調(diào)整旋轉(zhuǎn)頻率。搖動(dòng)不足可能導(dǎo)致溶液混合不充分和光學(xué)密度低,、變異性高和/或假值,；搖動(dòng)過(guò)度可能導(dǎo)致光學(xué)密度高和/或假值。

9 洗滌

正確的洗滌對(duì)于測(cè)定的可靠和精確性能至關(guān)重要,。不c底的洗滌會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生不利影響,。可能的后果是測(cè)量的光學(xué)密度出現(xiàn)不可控的,、非特異性的變化,，可能導(dǎo)致假結(jié)果,。高背景值或高變異性等效應(yīng)可能表明洗滌問(wèn)題。所有洗滌必須使用提供的稀釋至工作濃度的洗滌緩沖液進(jìn)行,。每個(gè)洗滌周期和每個(gè)孔的洗滌體積至少為300 ?L,。如果手動(dòng)洗滌，可通過(guò)多步裝置,、多通道移液器或噴瓶分配洗滌緩沖液,。將板洗滌至生物危害垃圾桶，然后每個(gè)孔加入300?L洗滌緩沖液WP,，倒出內(nèi)容物,，并在吸收性組織上拍打。重復(fù)此步驟2次,，共進(jìn)行3次洗滌,。

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)示例

以下數(shù)據(jù)僅用于演示，不能代替分析時(shí)生成的數(shù)據(jù),。

圖1：具有多項(xiàng)式二次曲線(xiàn)擬合的示例性標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),。

文獻(xiàn)參考：

1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning of themouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.

2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma protein encodedby the obese gene. Science. 269:543-546.

3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.

4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBS Lett.379:55-59.

5. Wabitsch M, Jensen PB, Blum WF, et al. 1996 Insulin and cortisol promote leptin production incultured human fat cells. Diabetes. 45:1435-1438.

ALPCO產(chǎn)品種類(lèi)多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人,、大/小鼠,、豚鼠、兔,、豬,、羊、狗,、猴等,，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝,、心血管疾病和氧化應(yīng)激,、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥,、內(nèi)分泌學(xué),、甲狀腺功能、腸胃病學(xué),、免疫學(xué),、生殖激素、抗體和抗原,、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域,，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見(jiàn)長(zhǎng)。

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