干細(xì)胞靜態(tài)懸浮培養(yǎng)方案:

VitroGel STEM 是一種無異種蛋白的水凝膠系統(tǒng)，用于提高三維（3D）培養(yǎng)的性能和擴(kuò)大人類多能干細(xì)胞（hPSCs）群體的規(guī)模，以創(chuàng)建一個高通量系統(tǒng)來模擬各種組織和疾病狀態(tài),。VitroGel STEM 是即用型的,，具有優(yōu)化的配方，w全支持快速擴(kuò)展具有多能性的高質(zhì)量3D干細(xì)胞球體。水凝膠系統(tǒng)可以通過不同的培養(yǎng)方法支持3D細(xì)胞生長,，如3D水凝膠包埋,、2D厚水凝膠涂層、水凝膠-細(xì)胞珠和靜態(tài)懸浮培養(yǎng),。

在本協(xié)議中,，我們將重點(diǎn)介紹使用VitroGel STEM進(jìn)行干細(xì)胞球體擴(kuò)增和規(guī)模化生產(chǎn)時(shí)的靜態(tài)懸浮培養(yǎng)方法,。從液氮中直接解凍的hPSCs或從2D基質(zhì)涂層培養(yǎng)容器中傳代的hPSCs可以立即與水凝膠溶液混合進(jìn)行靜態(tài)懸浮培養(yǎng),。此外，優(yōu)化的協(xié)議非常適合時(shí)間敏感的實(shí)驗(yàn),，因?yàn)樗恍枰l繁的培養(yǎng)基更換,，這最終可以節(jié)省時(shí)間和材料。VitroGel STEM與大多數(shù)hPSC培養(yǎng)基和組織培養(yǎng)容器兼容,。由于d特的靜態(tài)懸浮培養(yǎng)協(xié)議方法,，在大規(guī)模生物反應(yīng)器中使用時(shí)不需要微載體，從而使細(xì)胞收獲更加簡單和高效,。使用VitroGel STEM生產(chǎn)的3D干細(xì)胞球體可以用于進(jìn)一步的亞培養(yǎng),、模式分化或重新建立2D培養(yǎng)形態(tài)。

作為TheWell Bioscience中國區(qū)代理,，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦TheWell Bioscience銷售產(chǎn)品VitroGel STEM,。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷,。

工作流概述:

初始靜態(tài)懸浮培養(yǎng)協(xié)議：

推薦材料和試劑

VitroGel STEM

干細(xì)胞培養(yǎng)基（mTeSR‐PLUS, StemFlex, mTeSR‐1, Essential 8, NutriStem hPSC 等）

Y‐27632（10 mM/mL）

VitroGel 細(xì)胞回收溶液（產(chǎn)品編號 MS03‐100）（可選）

40,、70 或 100 µm 可逆篩網(wǎng)（可選）

細(xì)胞解離溶液（可選）

圓錐形管（15 mL 或 50 mL）

血清學(xué)吸管

細(xì)胞培養(yǎng)容器（孔板、T 瓶,、Erlenmeyer 燒瓶）

注意：VitroGel STEM 與多種培養(yǎng)容器兼容,，用于在靜態(tài)懸浮培養(yǎng)中生長干細(xì)胞。根據(jù)每個實(shí)驗(yàn)室所需的培養(yǎng)規(guī)模和可用系統(tǒng),，可能需要針對不同細(xì)胞類型優(yōu)化培養(yǎng)體積,。

設(shè)備:

生物安全柜（II級）

CO2 培養(yǎng)箱（37°C，5% CO2 和 95% 濕度）

離心機(jī)

移液管

旋轉(zhuǎn)搖床,、攪拌式反應(yīng)器或低速生物反應(yīng)器（10-40轉(zhuǎn)/分鐘,，可選）

參考數(shù)據(jù):

圖1。二維基質(zhì)培養(yǎng)hPSC的三維懸浮培養(yǎng)

如圖1所示,，24小時(shí)后,，小的hPSC球體開始形成。從第1天到第6天,，懸浮培養(yǎng)物中的細(xì)胞迅速生長,，導(dǎo)致健康的

以及高質(zhì)量的干細(xì)胞球體,。第3天，細(xì)胞數(shù)量急劇增加（圖1B）,，球體大小穩(wěn)步增加（圖1C）,。hPSC球體顯示

淺坑或麻點(diǎn)的特征，指示hPSC標(biāo)志物的表達(dá),，以及健康和高質(zhì)量干細(xì)胞球體的成功擴(kuò)增,。這個

這些球體為研究人員提供了大量健康的hPSC，用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)

TheWell Bioscience公司專注于3D細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)品,，為細(xì)胞再創(chuàng)體內(nèi)生長環(huán)境,。VitrogelTM3D 細(xì)胞培養(yǎng)水凝膠為無動物源性多糖水凝膠體系，模仿天然細(xì)胞外基質(zhì)環(huán)境,，可用于懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),，為體內(nèi)和體外研究提供共通的操作平臺。

VitroGel STEM(生化試劑)VitroGel STEM(生化試劑)