脂質包被珠被設計用于蛋白質下拉實驗。用于檢測純化蛋白質,、細胞裂解物中蛋白質的脂質結合,，或放射性標記的體外翻譯產(chǎn)物的結合。

磷脂酰乙醇胺（PE）珠由瓊脂糖組成,，每1毫升珠與10納摩爾的磷脂酰乙醇銨（PE）結合,，足以進行幾次蛋白質結合實驗。每1mL磷脂酰乙醇胺（PE）珠粒包括少量對照珠粒（P-B000）,。更多數(shù)量的控制珠也可供購買,。

作為Biogradetech-d家代理，艾美捷科技強烈推薦Biogradetech熱銷產(chǎn)品Phosphatidylethanolamine (PE) 瓊脂糖珠,。產(chǎn)品僅用于科研,，不可用于臨床診斷。

脂質珠檢測說明：

1. 脂質包被珠有1毫升和0.1毫升兩種規(guī)格,，以50%的懸液形式在1X PBS緩沖液中提供,。

2. 每1毫升的訂單附帶200微升的對照珠。對照珠也可單獨購買,，建議用于分析,。

3. 儲存在2-8°C。產(chǎn)品對溫度和光線敏感,，請勿冷凍,。

4. 以1000 x g或更低的速度離心珠。不要高速離心珠,，因為這可能會壓碎珠,。

5. 每1毫升珠中總共有10毫摩爾的結合脂質。

6. 珠的直徑范圍在45-165微米之間,。

7. 每個蛋白質使用50-100微升的50%懸液脂質包被珠和對照珠,。

8. 了解陽性對照蛋白列表。

脂質珠 - 蛋白質下拉協(xié)議

我們提供以下協(xié)議作為指南,，并強烈鼓勵研究人員查閱科學文獻并進行優(yōu)化實驗,，以確立對其感興趣的蛋白質z有利的條件。

1. 充分混合珠（不要使用渦旋）,。將50-100微升的50%珠懸液轉移到0.5-1.5毫升的管中,。

2. 以1000 x g或更低的速度離心珠。小心移除上清液,，避免丟失珠,。

3. 用洗滌緩沖液的10倍過量洗滌珠。輕輕混合，孵育1-2分鐘,。重復洗滌步驟兩次,。

4. 小心移除洗滌上清液，并將珠在含有您的蛋白質的結合緩沖液中重新懸浮,。

a. 對于純化的蛋白質,，使用1-10微克的蛋白質，用足夠的結合緩沖液稀釋形成50%脂質珠懸液,。

b. 對于細胞裂解物,、提取物、亞細胞組分：使用大約1毫克的總蛋白質對1毫升結合緩沖液,。將整個1毫升準備好的樣品加入到您洗滌過的珠中,。

5. 孵育蛋白質-珠溶液1-3小時。孵育可以在室溫或4°C下進行,，取決于您蛋白質的穩(wěn)定性,。需要連續(xù)運動以保持珠懸浮。

6. 離心珠并小心移除上清液,。如果需要,，上清液可以用來監(jiān)測未結合的蛋白質。

7. 用洗滌緩沖液的10倍過量洗滌珠,。輕輕混合,，孵育1-2分鐘。重復洗滌步驟五次,。如果您選擇在結合緩沖液中使用牛血清白蛋白（BSA）,，請確保在進行下一步之前將其c底洗出,。

8. 在最后一次洗滌后,，通過向珠中加入等體積的2X Laemmli樣品緩沖液（或類似物）并加熱至70°C 10分鐘來洗脫結合的蛋白質。

9. 加熱后,，離心珠并移除上清液,。將上清液儲存在4°C下，直到分析,。丟棄珠,。

10. 蛋白質可以通過SDS-PAGE分離，并通過凝膠的Coomassie藍染色,、蛋白質轉移和免疫印跡來檢測感興趣的蛋白質,，或進行自顯影。

文獻參考：

1) Hakuno, D., et al. (2018). “Hepatokine α1-Microglobulin Signaling Exacerbates Inflammation and Disturbs Fibrotic Repair in Mouse Myocardial Infarction." Scientific Reports 8(1): 16749.

2) Dudley, L. J., et al. (2019). “Intrinsic lipid binding activity of ATG16L1 supports efficient membrane anchoring and autophagy." The EMBO Journal: e100554.

Biogradetech成立于2015年,，總部位于美國加利福尼亞州,，早期以產(chǎn)品技術研發(fā)服務起家，逐步發(fā)展了廣泛的產(chǎn)品線,，并將其商業(yè)化銷售,，包括蛋白質,、抗體、酶,、培養(yǎng)基,、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學,、蛋白質組學,、分子生物學、免疫學,、微生物學,、診斷學、生物化學,、神經(jīng)科學,、血液分析和高通量藥物篩選等領域。

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