細(xì)胞衰老是指細(xì)胞停止分裂的現(xiàn)象,。

細(xì)胞衰老可以由內(nèi)部因素（氧化應(yīng)激、DNA損傷等）和外部因素（毒素,、紫外線(xiàn)等）誘導(dǎo),。衰老是一種細(xì)胞生長(zhǎng)停滯的狀態(tài)，細(xì)胞保持活性但不再分裂,。衰老細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)胞體積增大,、衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶（β-Gal）表達(dá)增加、p53和p16活性增強(qiáng),，以及基因表達(dá)模式的改變,。AkrivisBio的衰老檢測(cè)試劑盒旨在檢測(cè)β-Gal活性。β-Gal主要存在于衰老細(xì)胞中,，但在正常表達(dá)β-Gal的細(xì)胞（如成熟巨噬細(xì)胞）中可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性,。

艾美捷細(xì)胞衰老染色試劑盒：

貨號(hào)：COS-0102

規(guī)格：可用于染色4片24孔、12孔或6孔培養(yǎng)板

樣本類(lèi)型：培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞

適用物種：所有

檢測(cè)方法：光學(xué)顯微鏡

檢測(cè)類(lèi)型：定性檢測(cè)

應(yīng)用：用于在光學(xué)顯微鏡下檢測(cè)衰老細(xì)胞中的β-半乳糖苷酶（β-Gal）活性。

儲(chǔ)存條件：4°C

運(yùn)輸溫度：冰凝膠包運(yùn)輸

保質(zhì)期：自發(fā)貨之日起一年

檢測(cè)原理：

1.細(xì)胞被固定以使其變得通透,。

2.細(xì)胞經(jīng)過(guò)一夜染色,，以便在顯微鏡下觀(guān)察到藍(lán)色。

檢測(cè)試劑：

-固定液：125毫升

-X-gal（150毫克）：凍干粉,，綠色試劑瓶

-染色液：125毫升

-染色補(bǔ)充液：1.5毫升

用戶(hù)自備材料：

-N,N-二甲基甲酰胺（DMF）

-磷酸鹽緩沖液（PBS）

儲(chǔ)存和處理：

-將試劑盒儲(chǔ)存于-20°C,。溶解X-gal后，將溶液儲(chǔ)存于-20°C并避光,。

-以下協(xié)議是為12孔板的每個(gè)孔設(shè)計(jì)的,。如果使用不同規(guī)格的孔板，請(qǐng)相應(yīng)調(diào)整體積（例如,，對(duì)于6孔板,，體積加倍；對(duì)于24孔板,，體積減半）,。

-準(zhǔn)備PBS溶液（未提供），每孔3毫升,。

-X-gal溶液：X-gal具有吸濕性,。在打開(kāi)瓶蓋前，讓其在室溫下平衡30分鐘,。稱(chēng)取20毫克X-gal放入棕色或用鋁箔包裹的試管中,，加入1毫升N,N-二甲基甲酰胺，制備20倍濃縮液,。未使用的X-gal溶液可在-20°C（避光）下儲(chǔ)存1-2個(gè)月,。始終使用聚丙烯或玻璃容器存放X-gal溶液，不要使用聚苯乙烯,。

-固定液,、染色液和染色補(bǔ)充液（100倍濃縮）可在4°C下儲(chǔ)存。

-如果染色液或染色補(bǔ)充液中出現(xiàn)沉淀,，將溶液加熱至37°C以重新溶解沉淀,。如果沉淀仍然存在，離心試管并使用上清液,。

衰老檢測(cè)步驟：

1.通過(guò)在孔邊緣吸液移除培養(yǎng)基,，用1毫升PBS洗滌細(xì)胞一次。

2.用0.5毫升固定液在室溫下固定細(xì)胞10-15分鐘,。在細(xì)胞固定的同時(shí)準(zhǔn)備染色液,。根據(jù)要染色的孔數(shù)準(zhǔn)備足夠的溶液。對(duì)于每個(gè)孔,，準(zhǔn)備以下溶液：

-染色液：470微升

-染色補(bǔ)充液：5微升

-X-gal在DMF中的溶液：25微升

3.用1毫升PBS洗滌細(xì)胞兩次,。

4.向每個(gè)孔中加入0.5毫升染色液混合物,。蓋上孔板。在37°C下孵育過(guò)夜,。

5.在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞藍(lán)色的出現(xiàn)（放大倍數(shù)為40-400倍）,。

6.對(duì)于長(zhǎng)期保存染色后的孔板，移除染色液并加入70%甘油至細(xì)胞中,。在4°C下保存,。

示例：

X-gal染色的典型結(jié)果。  

出處：Tominaga, T., Shimada, R., Okada, Y., Kawamata, T., & Kibayashi, K. (2019). 鼠腦創(chuàng)傷后大腦中衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色,?！?span style="font-family: Calibri;">PLOS ONE》，14(3),，e0213673。doi:10.1371/journal.pone.0213673