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細胞衰老染色試劑盒-用于在光學顯微鏡下檢測衰老細胞中的β-Gal活性

時間:2025/4/8閱讀:91
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細胞衰老是指細胞停止分裂的現(xiàn)象。

細胞衰老可以由內(nèi)部因素(氧化應激,、DNA損傷等)和外部因素(毒素,、紫外線等)誘導。衰老是一種細胞生長停滯的狀態(tài),,細胞保持活性但不再分裂,。衰老細胞表現(xiàn)出細胞體積增大、衰老相關β-半乳糖苷酶(β-Gal)表達增加,、p53p16活性增強,,以及基因表達模式的改變。AkrivisBio的衰老檢測試劑盒旨在檢測β-Gal活性,。β-Gal主要存在于衰老細胞中,,但在正常表達β-Gal的細胞(如成熟巨噬細胞)中可能會出現(xiàn)假陽性。

 

艾美捷細胞衰老染色試劑盒

貨號:COS-0102

規(guī)格:可用于染色424孔,、12孔或6孔培養(yǎng)板

樣本類型:培養(yǎng)的貼壁細胞

適用物種:所有

檢測方法:光學顯微鏡

檢測類型:定性檢測

應用:用于在光學顯微鏡下檢測衰老細胞中的β-半乳糖苷酶(β-Gal)活性,。

儲存條件:4°C

運輸溫度:冰凝膠包運輸

保質(zhì)期:自發(fā)貨之日起一年

 

檢測原理

1.細胞被固定以使其變得通透。

2.細胞經(jīng)過一夜染色,以便在顯微鏡下觀察到藍色,。

 

檢測試劑

-固定液:125毫升

-X-gal150毫克):凍干粉,,綠色試劑瓶

-染色液:125毫升

-染色補充液:1.5毫升

 

用戶自備材料

-N,N-二甲基甲酰胺(DMF

-磷酸鹽緩沖液(PBS

 

儲存和處理

-將試劑盒儲存于-20°C。溶解X-gal后,,將溶液儲存于-20°C并避光,。

-以下協(xié)議是為12孔板的每個孔設計的。如果使用不同規(guī)格的孔板,,請相應調(diào)整體積(例如,,對于6孔板,體積加倍,;對于24孔板,,體積減半)。

-準備PBS溶液(未提供),,每孔3毫升,。

-X-gal溶液:X-gal具有吸濕性。在打開瓶蓋前,,讓其在室溫下平衡30分鐘,。稱取20毫克X-gal放入棕色或用鋁箔包裹的試管中,加入1毫升N,N-二甲基甲酰胺,,制備20倍濃縮液,。未使用的X-gal溶液可在-20°C(避光)下儲存1-2個月。始終使用聚丙烯或玻璃容器存放X-gal溶液,,不要使用聚苯乙烯,。

-固定液、染色液和染色補充液(100倍濃縮)可在4°C下儲存,。

-如果染色液或染色補充液中出現(xiàn)沉淀,,將溶液加熱至37°C以重新溶解沉淀。如果沉淀仍然存在,,離心試管并使用上清液,。

 

衰老檢測步驟

1.通過在孔邊緣吸液移除培養(yǎng)基,用1毫升PBS洗滌細胞一次,。

2.0.5毫升固定液在室溫下固定細胞10-15分鐘,。在細胞固定的同時準備染色液。根據(jù)要染色的孔數(shù)準備足夠的溶液,。對于每個孔,,準備以下溶液:

-染色液:470微升

-染色補充液:5微升

-X-galDMF中的溶液:25微升

3.1毫升PBS洗滌細胞兩次。

4.向每個孔中加入0.5毫升染色液混合物,。蓋上孔板。在37°C下孵育過夜。

5.在顯微鏡下觀察細胞藍色的出現(xiàn)(放大倍數(shù)為40-400倍),。

6.對于長期保存染色后的孔板,,移除染色液并加入70%甘油至細胞中。在4°C下保存,。

 

示例:

31.png

X-gal染色的典型結果,。  

出處:Tominaga, T., Shimada, R., Okada, Y., Kawamata, T., & Kibayashi, K. (2019). 鼠腦創(chuàng)傷后大腦中衰老相關β-半乳糖苷酶染色?!?span style="font-family: Calibri;">PLOS ONE》,,14(3)e0213673,。doi:10.1371/journal.pone.0213673


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