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細(xì)胞衰老是指細(xì)胞停止分裂的現(xiàn)象,。
細(xì)胞衰老可以由內(nèi)部因素(氧化應(yīng)激、DNA損傷等)和外部因素(毒素,、紫外線(xiàn)等)誘導(dǎo),。衰老是一種細(xì)胞生長(zhǎng)停滯的狀態(tài),細(xì)胞保持活性但不再分裂,。衰老細(xì)胞表現(xiàn)出細(xì)胞體積增大,、衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(β-Gal)表達(dá)增加、p53和p16活性增強(qiáng),,以及基因表達(dá)模式的改變,。AkrivisBio的衰老檢測(cè)試劑盒旨在檢測(cè)β-Gal活性。β-Gal主要存在于衰老細(xì)胞中,,但在正常表達(dá)β-Gal的細(xì)胞(如成熟巨噬細(xì)胞)中可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性,。
艾美捷細(xì)胞衰老染色試劑盒:
貨號(hào):COS-0102
規(guī)格:可用于染色4片24孔、12孔或6孔培養(yǎng)板
樣本類(lèi)型:培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞
適用物種:所有
檢測(cè)方法:光學(xué)顯微鏡
檢測(cè)類(lèi)型:定性檢測(cè)
應(yīng)用:用于在光學(xué)顯微鏡下檢測(cè)衰老細(xì)胞中的β-半乳糖苷酶(β-Gal)活性。
儲(chǔ)存條件:4°C
運(yùn)輸溫度:冰凝膠包運(yùn)輸
保質(zhì)期:自發(fā)貨之日起一年
檢測(cè)原理:
1.細(xì)胞被固定以使其變得通透,。
2.細(xì)胞經(jīng)過(guò)一夜染色,,以便在顯微鏡下觀(guān)察到藍(lán)色。
檢測(cè)試劑:
-固定液:125毫升
-X-gal(150毫克):凍干粉,,綠色試劑瓶
-染色液:125毫升
-染色補(bǔ)充液:1.5毫升
用戶(hù)自備材料:
-N,N-二甲基甲酰胺(DMF)
-磷酸鹽緩沖液(PBS)
儲(chǔ)存和處理:
-將試劑盒儲(chǔ)存于-20°C,。溶解X-gal后,將溶液儲(chǔ)存于-20°C并避光,。
-以下協(xié)議是為12孔板的每個(gè)孔設(shè)計(jì)的,。如果使用不同規(guī)格的孔板,請(qǐng)相應(yīng)調(diào)整體積(例如,,對(duì)于6孔板,,體積加倍;對(duì)于24孔板,,體積減半),。
-準(zhǔn)備PBS溶液(未提供),每孔3毫升,。
-X-gal溶液:X-gal具有吸濕性,。在打開(kāi)瓶蓋前,讓其在室溫下平衡30分鐘,。稱(chēng)取20毫克X-gal放入棕色或用鋁箔包裹的試管中,,加入1毫升N,N-二甲基甲酰胺,制備20倍濃縮液,。未使用的X-gal溶液可在-20°C(避光)下儲(chǔ)存1-2個(gè)月,。始終使用聚丙烯或玻璃容器存放X-gal溶液,不要使用聚苯乙烯,。
-固定液,、染色液和染色補(bǔ)充液(100倍濃縮)可在4°C下儲(chǔ)存。
-如果染色液或染色補(bǔ)充液中出現(xiàn)沉淀,,將溶液加熱至37°C以重新溶解沉淀,。如果沉淀仍然存在,離心試管并使用上清液,。
衰老檢測(cè)步驟:
1.通過(guò)在孔邊緣吸液移除培養(yǎng)基,,用1毫升PBS洗滌細(xì)胞一次。
2.用0.5毫升固定液在室溫下固定細(xì)胞10-15分鐘,。在細(xì)胞固定的同時(shí)準(zhǔn)備染色液,。根據(jù)要染色的孔數(shù)準(zhǔn)備足夠的溶液。對(duì)于每個(gè)孔,,準(zhǔn)備以下溶液:
-染色液:470微升
-染色補(bǔ)充液:5微升
-X-gal在DMF中的溶液:25微升
3.用1毫升PBS洗滌細(xì)胞兩次,。
4.向每個(gè)孔中加入0.5毫升染色液混合物,。蓋上孔板。在37°C下孵育過(guò)夜,。
5.在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞藍(lán)色的出現(xiàn)(放大倍數(shù)為40-400倍),。
6.對(duì)于長(zhǎng)期保存染色后的孔板,移除染色液并加入70%甘油至細(xì)胞中,。在4°C下保存,。
示例:
X-gal染色的典型結(jié)果。
出處:Tominaga, T., Shimada, R., Okada, Y., Kawamata, T., & Kibayashi, K. (2019). 鼠腦創(chuàng)傷后大腦中衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色,?!?span style="font-family: Calibri;">PLOS ONE》,14(3),,e0213673。doi:10.1371/journal.pone.0213673
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