測量KLH（匙孔血藍蛋白）誘導(dǎo)的抗KLH抗體水平可以定量評估免疫反應(yīng)（參考文獻1）。本ELISA試劑盒用于快速定量測量血清或血漿中的小鼠抗KLH IgG水平,。另一款配套的ELISA試劑盒,，貨號KA2461，用于測量小鼠抗KLH IgM水平,。

KLH IgG（小鼠）ELISA試劑盒用于定量測量血漿和血清中的KLH IgG,。

艾美捷KLH IgG(小鼠)ELISA試劑盒：

貨號：KA2460

校準范圍：6.25至100 µg/mL

適用樣本：血漿、血清

樣本體積：100 µL

標記：HRP結(jié)合物

檢測方法：比色法

監(jiān)管狀態(tài)：僅供研究使用（RUO）

測定類型：定量

反應(yīng)性：小鼠

應(yīng)用：定量

儲存說明：將凍干標準品儲存于-20℃,。將所有其他組分儲存于4℃,。

僅供研究使用（RUO）

測定原理：

KLH IgG（小鼠）ELISA試劑盒基于固相酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）。該測定使用KLH進行固相（微孔板孔）固定,，以及辣根過氧化物酶（HRP）結(jié)合的抗小鼠IgG抗體進行檢測,。將測試血清或血漿樣本稀釋后,，在微孔板孔中孵育1小時。隨后洗滌微孔板孔,，加入HRP結(jié)合物并孵育45分鐘,。抗KLH IgG分子因此被固定化的KLH和檢測抗體結(jié)合物夾在中間,。然后洗滌孔以去除未結(jié)合的HRP標記抗體,，并加入TMB試劑，在室溫下孵育20分鐘,。這將導(dǎo)致藍色顏色的產(chǎn)生,。通過加入終止液停止顏色發(fā)展，顏色變?yōu)辄S色,。在450 nm處用分光光度計測量吸光度,。抗KLH IgG的濃度與測試樣本的吸光度成正比,。

儲存說明：

參考標準品應(yīng)儲存于-20℃以保持最佳穩(wěn)定性,。

所有剩余試劑盒組分應(yīng)儲存于4℃。

微孔板應(yīng)與干燥劑一起密封保存,，以盡量減少暴露于潮濕空氣,。

如果按照上述說明儲存，試劑盒自購買之日起六個月有效,。

所需材料但未提供：

精確移液器和槍頭

蒸餾水或去離子水

聚丙烯或玻璃管

渦旋混合器

吸水紙或紙巾

微孔板孵育/振蕩器,，混合速度為150 rpm

平板洗滌器

具有0-4吸光度范圍的450 nm平板讀數(shù)器

圖表紙（可選PC繪圖軟件）

使用注意事項：

一般說明

僅供研究使用，不用于診斷目的,。

在使用試劑盒之前,，請仔細閱讀并理解說明書。

本試劑盒旨在測量免疫KLH后14天獲得的小鼠血清或血漿中的抗KLH IgG水平,。

所有試劑在使用前應(yīng)放置至室溫（25℃）,。

應(yīng)通過實驗確定最佳樣本稀釋度。然而,，研究表明,，對于大多數(shù)14天后免疫樣本，初始樣本稀釋度為20,000倍效果良好,。請勿使用小于25倍的稀釋度,。

如果在每個步驟中，試劑在5分鐘內(nèi)加入微孔板的孔中,，則可獲得最佳結(jié)果,。

操作限制：

當(dāng)按照詳細說明完整理解并執(zhí)行測定程序時，將獲得可靠且可重復(fù)的結(jié)果,。

洗滌步驟至關(guān)重要,。洗滌不足會導(dǎo)致精密度差和吸光度讀數(shù)虛高,。

試劑準備：

洗滌液準備

提供的洗滌液為20倍濃縮液。使用前,，將瓶中內(nèi)容物（50 mL）與950 mL蒸餾水或去離子水稀釋,。

標準品準備

小鼠抗KLH IgG標準品為凍干儲備液。用100 μL蒸餾水或去離子水復(fù)溶（復(fù)溶后的標準品在4℃下穩(wěn)定一周,，但如需日后使用,，應(yīng)分裝并冷凍于-20℃）。

標記5個聚丙烯或玻璃管,，分別為100,、50、25,、12.5和6.25單位/mL（u/mL）,。

在標記為100 u/mL的管中，加入抗KLH IgG標準瓶標簽上詳細說明的稀釋液體積,。然后加入指示體積的抗KLH IgG標準品（顯示在抗KLH IgG標準瓶標簽上）并輕輕混合,。這提供了100 u/mL的標準品。

向標記為50,、25,、12.5和6.25 u/mL的管中各加入250 μL稀釋液。

通過將100 u/mL標準品250 μL與標記為50 u/mL的管中的250 μL稀釋液混合稀釋,，制備50 u/mL標準品,。

同樣通過連續(xù)稀釋法制備25、12.5和6.25 u/mL的標準品,。

樣本準備：

一般說明：研究表明，KLH免疫小鼠血清中抗KLH IgG的濃度約為750,000 u/mL,。為了獲得在標準曲線范圍內(nèi)的數(shù)值,，我們建議樣本初次稀釋20,000倍，使用以下程序?qū)γ總€待測樣本進行操作：

分別向不同的管中加入248 μL和318 μL稀釋液,。

將2 μL血清樣本加入含有248 μL稀釋液的管中,，混勻。這提供了125倍稀釋的樣本,。

將2 μL 125倍稀釋的樣本與第二管中的318 μL稀釋液混合,。這提供了樣本的20,000倍稀釋。

對每個待測樣本重復(fù)此程序,。

標準曲線僅用于說明,，不應(yīng)用于計算未知量。每次進行測定時,，應(yīng)生成標準曲線,。

文獻參考：

1. Wada H, Noguchi Y, Marino MW, Dunn AR and Old LJ. T-cell functions in granulocyte/macrophage colony-stimulating factor deficient mice. Proc Natl Acad Sci. 94:12557-61 (1997).