關(guān)于IF實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生背景的原因及降低背景的常用方法：

IF降低背景：

高背景是免疫熒光常見(jiàn)的問(wèn)題,，解決此問(wèn)題可以用二抗來(lái)源的正常血清代替 BSA 做封閉液,，降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù),，洗滌至少三次,，每次五分鐘，推薦洗滌液為 PBS+0.05% Tween,。

我們實(shí)驗(yàn)室之前大多數(shù)都是使用BSA進(jìn)行封閉,，用正常血清代替BSA進(jìn)行封閉倒是第一次聽(tīng)說(shuō)，血清真的有如此奇效,，迫不及待的趕緊去嘗試了一番,，熒光背景確實(shí)顯著降低了。

血清作為封閉劑的原理：

強(qiáng)烈建議在PBS中稀釋至5％（v / v）的正常血清作為封閉劑,，以減少免疫反應(yīng)中非特異性,，保守序列和/或Fc受體結(jié)合的背景。用稀釋的正常血清與標(biāo)記抗體來(lái)自同一宿主,，可獲得最佳結(jié)果,，作為添加一級(jí)抗體之前的單獨(dú)孵育步驟。

用血清進(jìn)行封閉效果好嗎,？

封閉血清適用于免疫組化或者免疫熒光實(shí)驗(yàn)中樣本的封閉,，可以封閉待檢樣本中與蛋白質(zhì)非特異性結(jié)合的位點(diǎn)，另外還可以封閉樣品中內(nèi)源性的Fc片段結(jié)合位點(diǎn),，阻斷抗體與樣品中的Fc受體結(jié)合,，從而降低背景，減少假陽(yáng)性,。對(duì)于適用多抗的實(shí)驗(yàn),，選擇二抗種屬來(lái)源的正常血清是封閉處理的金標(biāo)準(zhǔn)。

封閉血清如何使用,？

推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍,，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細(xì)胞涂片上,，37℃度孵育10-30min（或者室溫1h）,，清除血清，不用洗滌，滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液,，37℃孵育1-2h或4℃過(guò)夜,。

艾美Jackson ImmunoResearch 封閉血清推薦：

產(chǎn)品名稱(chēng) 貨號(hào) 規(guī)格

Normal Donkey Serum（驢） 017-000-121 10 ml

Normal Alpaca Serum（羊駝） 028-000-121 10 ml

Normal Bovine Serum（牛） 001-000-121 10 ml

Normal Cat Serum（貓） 002-000-120 5 ml

Normal Chicken Serum（雞） 003-000-120 5 ml

Normal Dog Serum（狗） 004-000-120 5 ml

Normal Goat Serum（山羊） 005-000-121 10 ml

Normal Syrian Hamster Serum（敘利亞倉(cāng)鼠） 007-000-120 5 ml

Normal Horse Serum（馬） 008-000-121 10 ml

Normal Human Serum（人） 009-000-121 10 ml

Normal Mouse Serum（小鼠） 015-000-120 5 ml

Normal Rabbit Serum（兔） 011-000-120 5 ml

Normal Rat Serum（大鼠） 012-000-120 5 ml

Normal Sheep Serum（綿羊） 013-000-121 10 ml

Normal Swine Serum（豬） 014-000-121 10 ml

艾美捷科技是Jackson ImmunoResearch的中國(guó)代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù),。