Hypoxyprobe™-1 CY 7 Kit 組件詳細描述：

Hypoxyprobe™-1是一種取代的2-硝基咪唑,，其化學名稱為吡唑噻唑鹽酸鹽,，分子量為290.8,；水溶性為400毫摩爾（116 mg/ml）,；在324 nm處的紫外吸收度（在0.9%鹽水中的消光系數(shù)為7020）,。其游離堿形式的吡唑噻唑分子量為254.3，pKa為8.7,，辛醇-水分配系數(shù)為8.5,。固體Hypoxyprobe™-1在溫室陰暗環(huán)境中存儲了兩年，并在0.9%鹽水（100 g/升）中在4°C下保存了4.5年,，沒有檢測到降解（紫外線和高效液相色譜分析）。吡唑噻唑在缺氧細胞中經(jīng)過還原激活,，與蛋白質(zhì),、肽和氨基酸中的巰基（硫氫基）形成穩(wěn)定的加合物。CY 7染料-MAb1能夠與這些加合物結(jié)合,，從而通過免疫化學方法進行檢測,。

CY 7染料-MAb1是一種染料結(jié)合的鼠IgG1單克隆抗體（MAb克隆4.3.11.3），以0.5 mg/ml的濃度在含有1% BSA和0.09%疊氮鈉的PBS中提供,。感興趣的組織可以通過免疫組織化學在冷凍固定切片或福爾馬林固定石蠟嵌入切片上進行研究,，或者在組織解離后通過流式細胞術(shù)進行分析。注意：CY 7染料-MAb1與吡唑噻唑的蛋白質(zhì),、肽和氨基酸加合物結(jié)合,，但免疫組織化學過程中的組織處理會沖洗掉肽和氨基酸加合物，因此免疫組織化學缺氧檢測依賴于缺氧組織中吡唑噻唑的蛋白質(zhì)加合物,。

艾美捷CY 7：

貨號：HPB-CY 7

應(yīng)用：用于細胞和組織缺氧的免疫化學檢測,，包括免疫熒光、免疫過氧化物酶法或流式細胞術(shù),。該Hypoxyprobe™-1 CY 7試劑盒在福爾馬林固定,、石蠟嵌入的鼠腫瘤組織中提供強烈的免疫染色，背景極低,。

數(shù)量：

a. Hypoxyprobe™-1 CY 7試劑盒包含100 mg,、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe™-1（哌莫地爾鹽酸鹽）。通常,，動物研究中使用的劑量為60 mg/kg體重,。

b. 一個小瓶（100 mg和200 mg試劑盒）或兩個小瓶（1000 mg試劑盒）含有200微升的稀釋的CY 7染料偶聯(lián)IgG1大鼠單克隆抗體（克隆11.23.22.R）。每個小瓶含有200微升的0.50 mg/ml CY 7染料-MAb1溶液,，溶劑為PBS,，含1% BSA和0.09%疊d化鈉,。CY 7染料-MAb1的最佳稀釋度由研究人員確定，但發(fā)現(xiàn)1:50-100的稀釋度在鼠腫瘤組織中能產(chǎn)生強烈的免疫熒光染色,。CY 7染料-MAb1專為免疫熒光設(shè)計,，可在熒光顯微鏡下或流式細胞術(shù)和西方印跡應(yīng)用中觀察。免疫熒光中的抗體稀釋通常低于免疫過氧化物酶檢測系統(tǒng)中使用的稀釋度,。

不提供：

用于免疫組織化學分析的標準試劑,。

儲存：

a. 將Hypoxyprobe™-1固體在室溫下避光保存（也可在2-8°C避光保存）。

b. 將CY 7染料-MAb在2-8°C避光保存,。請勿冷凍,。

Hypoxyprobe™-1 CY 7 Kit檢測說明：

正常或腫瘤組織缺氧的研究開始于靜脈注射,、腹腔注射或口服攝入Hypoxyprobe™-1（吡唑噻唑鹽酸鹽）溶液,，劑量為60 mg/kg體重。對于25克的大鼠,，這相當于1.5 mg/鼠,。在小鼠中，已使用高達400 mg/kg的劑量,，未檢測到毒性或組織缺氧變化,，但60 mg/kg的劑量在成本低的情況下可獲得良好的免疫染色。Hypoxyprobe™-1在鹽水中的溶解度為116 mg/ml,，因此可以使用非常小的體積來給藥,。注射或攝入后，Hypoxyprobe™-1會分布到所有組織,，包括大腦,，但僅在氧濃度低于14微摩爾（相當于37°C下的分壓pO2 = 10 mm Hg）的細胞中與含巰基的蛋白質(zhì)形成加合物。除了腫瘤外,，肝臟,、腎臟和皮膚等正常組織也含有pO2等于或低于10 mmHg的細胞，因此這些正常組織會結(jié)合Hypoxyprobe™-1,。Hypoxyprobe™-1在小鼠體內(nèi)的血漿半衰期約為25分鐘,。相比之下，大鼠的血漿半衰期為45分鐘,，狗為90分鐘,，人類為300分鐘。感興趣的大鼠組織可在Hypoxyprobe™-1給藥后15到90分鐘內(nèi)收集,。在收集時,，組織中殘留的Hypoxyprobe™-1會在組織缺氧時結(jié)合，但與組織在15到90分鐘實驗期間暴露于的Hypoxyprobe™-1量相比，殘留的Hypoxyprobe™-1量非常少,，因此由殘留的Hypoxyprobe™-1引起的非特異性結(jié)合是不可檢測的,。

除了動物研究外，Hypoxyprobe™試劑盒還可以用于細胞培養(yǎng),。通常,，細胞懸液在100到200微摩爾的Hypoxyprobe™-1存在下，在缺氧條件下孵育1到2小時,。隨后,，細胞通過細胞離心收集，固定并用CY 7 MAb-1進行免疫染色,。