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防御素是陽離子抗菌肽,由多種細(xì)胞類型(如白細(xì)胞,、上皮細(xì)胞和樹突細(xì)胞)產(chǎn)生,,在哺乳動物的先天免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。人類已描述兩類防御素:α-防御素和β-防御素,,其分子量范圍為3.5至4.5 kDa,,由三對分子內(nèi)二硫鍵穩(wěn)定,不同的成熟肽中二硫鍵的排列順序也各不相同,。目前,,已有六種α-防御素(也稱為人類中性粒細(xì)胞肽,HNP1-6)和六種β-防御素(HBD1-6)被研究,。這些防御素均顯示出對細(xì)菌,、真菌和包膜病毒的廣譜體外抗菌活性,這種活性在體內(nèi)保護(hù)宿主免受病原體侵害方面非常重要,。
研究者還探討了防御素誘導(dǎo)釋放與炎癥和適應(yīng)性免疫相關(guān)的細(xì)胞因子和趨化因子的能力,,從而在先天免疫與適應(yīng)性免疫之間提供了一種調(diào)節(jié)作用。相關(guān)研究已經(jīng)測量了血清,、唾液,、乳汁、羊水以及肺部和宮頸陰道沖洗液中的防御素,,以及血液,、肺、皮膚,、腸道,、肌肉,、軟骨和腎臟等組織細(xì)胞培養(yǎng)基中的防御素。
Alpha Diagnostics開發(fā)了一種免疫測定法,,用于檢測和定量人類樣本中的β-防御素2,,以用于先天免疫研究。該試劑盒適用于多種樣本類型,,并經(jīng)過適當(dāng)?shù)木€性和回收驗(yàn)證,。
Alpha Diagnostic International人β防御素2(hBD-2)ELISA試劑盒是一種夾心ELISA試劑盒用于定量BD-2人細(xì)胞培養(yǎng)物和適當(dāng)合格的來自血清、唾液或其他組織液的樣本,。僅供研究使用(RUO),;不用于治療或診斷使用。
艾美捷Alpha Diagnostic International 人β-防御素-2(BD-2)ELISA試劑盒,,定量,,96次檢測(ADI-100-250-BD2)檢測原理:
人β-防御素2 ELISA試劑盒是基于樣本中人類β-防御素2與兩種抗體的結(jié)合。一個(gè)抗體固定在微孔板上,,另一個(gè)抗體則與生物素偶聯(lián),,隨后與鏈霉親和素過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)物結(jié)合。在洗滌步驟后,,添加顯色底物,,通過HRP對TMB底物的酶促反應(yīng)生成顏色,這種顏色的深淺與樣本中BD-2的含量成正比,。然后添加終止溶液以停止反應(yīng),,并使用ELISA微孔板讀數(shù)儀在450nm處測量吸光度。樣本中BD-2的濃度是通過Z定濃度的純化重組人BD-2標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出的,。
結(jié)果計(jì)算:
結(jié)果可以使用任何免疫檢測軟件包進(jìn)行計(jì)算,。推薦使用四參數(shù)曲線擬合。如果沒有可用的軟件,,可以按以下步驟確定BD-2的濃度:
1,、計(jì)算重復(fù)樣品的平均光密度(OD)。
2,、在圖紙上將標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD(y軸)與BD-2的濃度(pg/ml,,x軸)繪制成圖。通過這些點(diǎn)繪制最佳擬合曲線以構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,。逐點(diǎn)構(gòu)建是最常見和可靠的方法,。
3、可以通過從標(biāo)準(zhǔn)曲線插值法確定未知樣品和對照的BD-2濃度,。
4,、將獲得的樣品值乘以稀釋因子。
5,、產(chǎn)生的信號高于200 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)的樣品應(yīng)進(jìn)一步稀釋并重新檢測,。
典型結(jié)果:
Alpha Diagnostic International(ADI)致力于開發(fā),、制造和供應(yīng)新型診斷和質(zhì)量控制試劑及檢測試劑盒,用于人類和動物的基礎(chǔ)生物學(xué)和疾病研究,。艾美捷科技是Alpha Diagnostic International 的特約合作代理商,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù),。
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