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cAMP是一種普遍存在于所有哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的第二信使。這種信使調(diào)節(jié)各種激素,、神經(jīng)遞質(zhì),、生長因子、細(xì)胞因子和其他配體受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),。cAMP磷酸二酯酶是水解和截?cái)嘣醋允荏w激活的cAMP信號傳導(dǎo)的唯1途徑,。cAMP水解活性由一個(gè)相當(dāng)大的多酶家族提供,該家族具有D特的細(xì)胞內(nèi)定位和調(diào)節(jié)特性,。在各種PDE家族(PDE1-PDE11)中,,PDE4有4個(gè)基因(PDE4A、PDE4B,、PDE4C,、PDE4D)以多剪接變體形式表達(dá),。
PDE4活性測量需要兩步反應(yīng),在第一步反應(yīng)中,,cAMP被PDE活性水解成非環(huán)狀,。通過使PDE源變性或加入PDE4選擇性抑制劑來停止該反應(yīng),然后通過第二步酶反應(yīng)將AMP轉(zhuǎn)化為腺苷達(dá)到平衡,。由于腺苷是中性的,,因此通過離子交換色譜法用電荷分離cAMP或AMP。為了避免其他PDE的背景貢獻(xiàn),,該PDE測定在針對PDE4優(yōu)化的底物濃度下進(jìn)行,。PDE4酶活性與第一反應(yīng)中形成的腺苷成正比。
PDE4活性測量在2-3小時(shí)內(nèi)提供可重復(fù)的結(jié)果,。該試劑盒提供足夠的試劑,與內(nèi)部控制一起處理50或100個(gè)樣本,。試劑盒試劑在推薦條件下儲(chǔ)存可穩(wěn)定6個(gè)月,。該試劑盒的內(nèi)容物必須按照瓶子標(biāo)簽和規(guī)格表上的指示在不同溫度下儲(chǔ)存。
艾美捷FabGennix-PDEase套件(PDEase-100)組成成分:
孵育緩沖液試劑A:5毫升
孵育緩沖液試劑B:5毫升
孵育緩沖液試劑C:5毫升
PDE底物緩沖液D:10毫升
PDE底物:2倍200微升
抑制劑緩沖液:50毫升
第二酶源(10倍濃縮液): 2倍250微升
樹脂懸浮液(10倍濃縮液):100毫升
PDE4酶對照:1倍200微升
文獻(xiàn)參考:
Joshi, Rashika, et al. "Phosphodiesterase (PDE) inhibitor torbafylline (HWA 448) attenuates burn-induced rat skeletal muscle proteolysis through the PDE4/cAMP/EPAC/PI3K/Akt pathway." Molecular and cellular endocrinology 393.1 (2014): 152-163. PMID24973766
Al-Tawashi, Azza, and Chris Gehring. “Phosphodiesterase Activity Is Regulated by CC2D1A That Is Implicated in Non-Syndromic Intellectual Disability." Cell Communication and Signaling?: CCS 11 (2013): 47. PMC3704924
Gobejishvili, Leila et al. “Rolipram Attenuates Bile Duct Ligation–Induced Liver Injury in Rats: A Potential Pathogenic Role of PDE4." The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 347.1 (2013): 80–90. PMC. PMC3781411
Gobejishvili, Leila et al. “S-Adenosylmethionine Decreases Lipopolysaccharide-Induced Phosphodiesterase 4B2 and Attenuates Tumor Necrosis Factor Expression via cAMP/Protein Kinase A Pathway." The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 337.2 (2011): 433–443. PMC3083110
Li, Yuting et al. “Regulation of Amygdalar PKA by β-Arrestin-2/phosphodiesterase-4 Complex Is Critical for Fear Conditioning."Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 106.51 (2009): 21918–21923. PMC2799795
艾美捷科技是FabGennix的中國代理商,,為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù),。
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