COX1（環(huán)氧合酶1），也稱為前列腺素內(nèi)過氧化物合酶1（PTGS）,，是一種過氧化物酶,，通過將花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素H2參與前列腺素的形成。COX1在大多數(shù)細胞中恒定表達,，并參與組織穩(wěn)態(tài),。COX-1通過增加粘液和碳酸氫鹽的形成，減少酸和胃蛋白酶的分泌,，并保持適當?shù)难?，促進胃粘膜的細胞保護。它參與血小板中血栓素A2（TxA2）的形成,，這刺激了聚集和血管收縮,。COX1和COX2在523位點不同，COX2有一個纈氨酸,，而COX1有一個異亮氨酸殘基,，這使得開發(fā)特定抑制劑成為一個挑戰(zhàn)。使用COX抑制劑或NSAIDs（非甾體抗炎藥）是常見的用于管理疼痛和炎癥的方法,。傳統(tǒng)的NSAIDs,，如阿司匹林和布洛芬，可能導致消化系統(tǒng)的損害,。使用低劑量阿司匹林可以幫助預防動脈血栓形成,，發(fā)現(xiàn)其他能夠抑制COX1的化合物可能證明在心血管疾病治療中作為輔助藥物是有益的。

COX1抑制劑篩查試劑盒旨在測量COX1（環(huán)氧化酶1）活性,，用于篩查和分析應用,。該檢測試劑盒采用方便的96孔格式，含有足夠的純化重組COX1,、Amplex™Red,、花生四烯酸稀釋劑、COX檢測緩沖液和100%乙醇,，可用于100種酶反應,。

艾美捷COX1抑制劑篩選檢測試劑盒：

貨號：BPS-82203

測定試劑盒格式：熒光生成

物種：人類

需要但不提供的物料：

花生四烯酸（Cayman Chemical #90010.1）

可調(diào)微量移液器和無菌吸頭

能夠在λex535/λem590 nm下測量的熒光板讀數(shù)器

儲存/穩(wěn)定性：

如果按照指示儲存材料，這個測定試劑盒在收到日期后的6個月內(nèi)將表現(xiàn)最佳,。

應用：研究酶動力學,，篩選小分子抑制劑，用于藥物發(fā)現(xiàn)和高通量篩選應用,。

運輸溫度：-80°C

科學類別：代謝酶

僅供研究使用

COX1抑制劑篩選檢測試劑盒測定協(xié)議：

• 所有樣本和對照應以雙份進行,。

• 測定應包括“陰性對照",、“陽性對照"和“試驗抑制劑"條件。

• 建議使用時將稀釋后的蛋白質(zhì)保持在冰上,。

• 有關蛋白質(zhì)處理的詳細信息,，請參閱蛋白質(zhì)常見問題解答。

• 推薦使用Valdecoxib作為內(nèi)部對照,。如果不對控制抑制劑進行劑量反應曲線測定,，建議以0.1倍、1倍和10倍IC50值運行控制抑制劑,，IC50值如下所示,。

1. 將COX測定緩沖液和Amplex™ Red解凍。

2. 在冰上解凍COX1,。輕輕旋轉(zhuǎn)管子以回收其全部內(nèi)容物,。

3. 用COX測定緩沖液將COX1稀釋至35 ng/µl（每個孔需要20 µl）。

4. 將稀釋后的COX1 20 µl添加到所有孔中,，除了“陰性對照"孔。

5. 向“陰性對照"孔中添加70 µl的COX測定緩沖液,。

6. 準備試驗抑制劑（每個孔10 µl）：對于滴定,，準備比期望的最終濃度高10倍的連續(xù)稀釋。反應的最終體積為100 µl,。

6.1. 如果試驗抑制劑是水溶性的,，在COX測定緩沖液中準備比期望的最終濃度高10倍的連續(xù)稀釋。對于陽性和陰性對照,，使用COX測定緩沖液（稀釋液）,。

7. 將10 µl試驗抑制劑添加到z定的“試驗抑制劑"孔中。

8. 將10 µl稀釋液添加到“陽性對照"和“陰性對照"孔中,。

9. 將Amplex™ Red用蒸餾水稀釋10倍,。

10. 向所有孔中添加10 µl稀釋后的Amplex™ Red。

11. 在玻璃瓶中準備花生四烯酸（未提供）,，12. 向所有孔中添加10 µl 0.5 mM花生四烯酸,。

13. 立即在熒光讀數(shù)器中讀取樣品的熒光強度（激發(fā)波長 = 535 nm；發(fā)射波長 = 590 nm）,。

COX1抑制劑篩選檢測試劑盒示例結(jié)果：

在濃度增加的SC-560（Tocris#1550）存在下測量COX1活性

COX1抑制劑篩選檢測試劑盒文獻參考：

Zaragoza C., et al., 2022 Molecules 27(3):1146.

Bruno A., et al., 2023 Adv Pharmacol 97:133-165.

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