FuGENE SI RNA轉(zhuǎn)染試劑利用與 DNA 轉(zhuǎn)染試劑相同的溫和可靠性,，FuGENE SI,，這是一種為 siRNA 傳遞而設(shè)計(jì)的創(chuàng)新 RNA 轉(zhuǎn)染試劑,。FuGENE SI 是一種 100% 合成的多組分轉(zhuǎn)染試劑，專為將 RNA 分子傳遞到真核細(xì)胞系而設(shè)計(jì),。

FuGENE SI轉(zhuǎn)染試劑是一種多組分試劑,，它能與siRNA,、miRNA和其他小RNA形成復(fù)合物，然后安全高效地將其運(yùn)輸?shù)秸婧思?xì)胞內(nèi),。

艾美捷FuGENE SI RNA轉(zhuǎn)染試劑（#SI-1000）的優(yōu)勢(shì)包括：

在對(duì)細(xì)胞溫和的同時(shí),，提供優(yōu)質(zhì)的敲低效率。

在許多常見的細(xì)胞類型和難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系中具有高轉(zhuǎn)染效率,。

細(xì)胞毒性z小或無,，允許您使用較少的細(xì)胞進(jìn)行工作，并消除了更換培養(yǎng)基的要求,。

需要z小的優(yōu)化。

靈活且快速的協(xié)議,。

RNA干擾：

FuGENE SI專為將siRNA,、miRNA和其他小RNA輸送到常規(guī)和難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系而設(shè)計(jì)。以10nM的siRNA作為起點(diǎn),。

細(xì)胞培養(yǎng)條件：

通過使用經(jīng)常傳代,、增殖良好（好處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期）、并以一致的密度接種的細(xì)胞,，z小化轉(zhuǎn)染效率的變異性,。

其他培養(yǎng)基添加劑：

在某些細(xì)胞類型中，通常包含在細(xì)胞培養(yǎng)基中的抗菌劑（例如,，抗生素和殺真菌劑）可能對(duì)FuGENE SI轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率產(chǎn)生不利影響,。如果可能，z初實(shí)驗(yàn)時(shí)排除這些添加劑,。一旦建立了高效率的條件,，可以在監(jiān)測(cè)您的轉(zhuǎn)染結(jié)果的同時(shí)重新添加這些組分。

孵育時(shí)間：

將細(xì)胞孵育24至72小時(shí),。孵育時(shí)間的長(zhǎng)度取決于siRNA基因靶標(biāo),、被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型，以及所使用的下游檢測(cè)方法,。在此孵育期后,，使用適合您系統(tǒng)的檢測(cè)方法測(cè)量基因或蛋白表達(dá)。

附加所需試劑和耗材：

1.) 無菌,、無血清的DMEM培養(yǎng)基,，無添加劑或補(bǔ)充劑。

2.) siRNA,、miRNA或相關(guān)的小RNA,。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染前的準(zhǔn)備：

選擇以下選項(xiàng)之一：

選項(xiàng) 1：快速前向協(xié)議：

在轉(zhuǎn)染當(dāng)天，接種細(xì)胞（通常是在傳統(tǒng)協(xié)議中細(xì)胞接種量的2倍,，即在轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞）,。直接進(jìn)行轉(zhuǎn)染,。

選項(xiàng) 2：傳統(tǒng)前向協(xié)議：

在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前一天，用胰蛋白酶處理細(xì)胞,，調(diào)整細(xì)胞濃度,，并進(jìn)行接種。將細(xì)胞放置在孵化器中過夜,。

選項(xiàng) 3：反向（高通量篩選）協(xié)議：

按照說明在試劑板中制備FuGENE SI和siRNA復(fù)合物,，直接將細(xì)胞添加到含有復(fù)合物的試劑板中（通常是在傳統(tǒng)前向協(xié)議中細(xì)胞接種量的2倍）。

如何使用FuGENE SI RNA轉(zhuǎn)染試劑,？

概述的協(xié)議將生成足夠的主混合液,，用于轉(zhuǎn)染單個(gè)35毫米培養(yǎng)皿、6孔板的一個(gè)孔,、24孔板的五個(gè)孔,，或96孔板的二十五個(gè)孔，比例為推薦起始比例（每個(gè)96孔板孔0.3微升FuGENE SI + 1皮摩爾siRNA）,。對(duì)于進(jìn)一步的擴(kuò)展和其他容器尺寸,，請(qǐng)參見表1。

1.) 使用前讓FuGENE SI轉(zhuǎn)染試劑,、RNA和培養(yǎng)基調(diào)整至室溫,。旋渦混合一秒，或倒置FuGENE SI轉(zhuǎn)染試劑瓶以混合,。

2.) 在兩個(gè)不同的管中用無血清培養(yǎng)基（無抗生素或殺真菌劑）稀釋FuGENE SI試劑和siRNA：

標(biāo)記兩個(gè)管：1.) “FuGENE SI" 2.) “siRNA",。

管1：通過將7.5微升FuGENE SI吸入117.5微升培養(yǎng)基中，準(zhǔn)備125微升稀釋的FuGENE SI,。立即輕敲管子或旋渦混合一秒以混合,。

管2：通過將2.5微升10微摩爾siRNA吸入122.5微升培養(yǎng)基中，準(zhǔn)備125微升200納摩爾siRNA,。輕敲管子或旋渦混合以混合,。

3.) 形成FuGENE SI和siRNA復(fù)合物：

將125微升稀釋的siRNA（管2 “siRNA"）加入到125微升稀釋的FuGENE SI（管1 “FuGENE SI"）中，制成250微升的復(fù)合溶液,。輕敲管子或旋渦混合一秒以混合,。

4.) 孵育siRNA-FuGENE SI復(fù)合物：

在室溫下孵育siRNA-FuGENE SI復(fù)合物5分鐘（z長(zhǎng)可達(dá)15分鐘）。

5.) 將siRNA-FuGENE SI復(fù)合物加入細(xì)胞：

從孵化器中取出培養(yǎng)容器,。無需移除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。以滴加方式將siRNA-FuGENE SI復(fù)合物加入細(xì)胞。搖動(dòng)孔板或燒瓶以確保分布到整個(gè)板表面,。

35毫米容器：加入250微升至孔中（每個(gè)孔z終使用量：25皮摩爾siRNA + 7.5微升FuGENE SI）

24孔板：每個(gè)孔加入50微升（每個(gè)孔z終使用量：5皮摩爾siRNA + 1.5微升FuGENE SI）

96孔板：每個(gè)孔加入10微升（每個(gè)孔z終使用量：1皮摩爾siRNA + 0.3微升FuGENE SI）

關(guān)于向其他容器尺寸添加復(fù)合物的數(shù)量的詳細(xì)信息,，請(qǐng)參見表1。

6.) 孵育細(xì)胞24-72小時(shí),。然后,，通過選擇的方法分析轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,。

注意：

與任何實(shí)驗(yàn)一樣，包括適當(dāng)?shù)膶?duì)照,。準(zhǔn)備未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞孔,、僅含轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞孔，以及適當(dāng)?shù)年栃院完幮詸z測(cè)對(duì)照孔,。

siRNA與FuGENE SI的z佳比例,，以及添加復(fù)合物的z佳總量可能因細(xì)胞系、細(xì)胞密度,、檢測(cè)日和基因靶標(biāo)而異,。我們建議在96孔板的每個(gè)孔中測(cè)試0.1-10.0皮摩爾siRNA和0.15-0.6微升FuGENE SI。

表1：制備各種培養(yǎng)容器尺寸的FuGENESI+siRNA復(fù)合物的指南表1強(qiáng)調(diào)了各種容器尺寸的起始量,，使用1pmol siRNA+0.3ul FuGENE SI建議的96孔培養(yǎng)容器單孔起始量,。請(qǐng)注意，這只是一個(gè)起點(diǎn),，對(duì)于特定的細(xì)胞系和應(yīng)用，可能需要優(yōu)化siRNA+FuGENESI比例和每孔添加的復(fù)合物總量,。